L2型沙眼衣原体主要外膜蛋白基因克隆及表达

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1、沈阳药科大学硕士学位论文L<,2>型沙眼衣原体主要外膜蛋白基因克隆及表达姓名：惠春申请学位级别：硕士专业：微生物药学指导教师：游松;刘大成2002.6.1L2型沙眼衣腺体主要外膜蛋白基园克隆及表选摘要本实验采用PCR技术，从k型沙眼衣原体DNA中扩增出MOMP基因，与pMDl8-T载体重组行T／A克隆，并进行DNA序列分析，证明所克隆基因为MOMPDNA序列。设计一条较为合理的表达方案，将MOMP基因片段与pBV221定向重组转化大肠杆菌JMl09(DE3)，得到具有MOMP抗原性的表达蛋白，为研究MOMP的生物学功能以

2、及研制沙眼衣原体基因工程亚单位疫苗奠定了基础。关键词：PCRDNA重组螽袭乡≥碗隆k型沙眼衣原体关键词：重组睁争盯吖A漉隆k型沙眼衣原体^一MOMP基因工程k黔鞋衣琢体主要捧壤誉岛基霹竟攮爰裹蒜ABSTRACTMOIvlPGENEisamplifiedbyusingPCRteehnologyfromDNAofbm粥概Chhmydia。ThePCRproductsa糙recombi般twithvectorsofpMDIS--T,Moreover,therecombinantplasmidsa撑colonged。"IheDN

3、Asequenceanalysisshowstheinsertfi'agmentisMOMPDNA．Forcreatingareasonabledisplay'ragmethod,MOMPGENEfragmentandpBV221arereeombinedofitational每-Theyare缸ansformedll物Kc'otiJ／vlt09(DE3)．aexpressingproteinwasgotwithIvlOMPantigen,This,studyestablishesthefoundationfbradva

4、nceresearchofMOMP．Forflaemore，itaisosetupaplatformformakingtheTrachomaChlamTdiavacchue．Keywords：PCRDNArex)ombinetmnsfoanT／AcotongMOMPIa_TrachomaChlamydiageneticengineefimg2L2型沙眼衣原体主要外胰蛋白基因克陆及表达日Ⅱ吾沙眼衣原体(Ct)是发展中国家致盲的主要病因和发达国家性传播疾病的重要病原。Ct专性细胞内寄生，人是Ct的自然宿主。Ct可感染阴道、尿

5、道、直肠与鼻咽等粘膜上皮细胞和眼结膜等处，引起多种疾病‘11。除沙眼外，在女性可致盆腔炎、输卵管炎、宫颈炎、异位妊娠、流产、死胎及不育等；在男性则引起非淋球菌尿道炎、附睾炎；在婴JIJ．0引起眼结膜炎、肺炎等。近年来Ct感染呈上升趋势【2]。为最常见的性传播疾病之一。尤其是L2型沙眼衣原体还可导致性病淋巴肉芽肿‘3，41。据国外报道，在泌尿生殖道的感染中，Ct的重要性已超过淋球菌而成为性传播疾病的主要病原体‘51。已知40％一50％的非淋球菌性尿道炎是由沙眼衣原体引起的161。目前正在寻找有效的疫苗以防止ct感染性疾病的

6、传播，衣原体主要外膜蛋白(MOMP)是生产疫苗最理想的抗原，MOMP特异性单克隆抗体(MeAb)能在体外阻止衣原体的吸附而中和感染⋯。因此，MOMP可能是Ct疫苗的重要侯选蛋白[Sl。由于衣原体外膜在感染过程和疫苗研制中的重要性，多年1k型沙眼农原体主要外膜蛋白基因克臻及表选来一直是研究的重点。利用各种现代化技术已阐明衣原体的外膜复合物(COMC)的主要成分是40、60、12KD的蛋白质和脂多糖(LPS)[91。沙眼衣原体的所有15个型均含有MOMP,其编码基因长约1．2Kb，编码375个氨基酸主要外膜蛋白(MOMP)，

7、分子量为40KD的MOMP在原体(EB)和网状体(RB)中都存在，占外膜总蛋白的60％以上。将从EB获得的MOMP插入人工膜，发现具有穿孔的功能，类似革兰氏阴性细菌的一种外膜蛋白，能形成内外物质交换的通道Ⅲ】。然而完整的“微孔蛋白”活性只有用二硫苏糖醇(DTT)还原和用碘乙酮封闭巯基后才表现出来，这是衣原体MOMP特性。MOMP上含有属、种、亚种和型别特异性抗原决定簇112,131。MOMP不仅是一种重要的结构蛋白，更是重要的功能蛋白。体外研究表明，抗CtMOMP的单抗可明显地阻断Ct对培养细胞的入侵及在细胞中的生长繁殖

8、过程【¨1，说明MOMP还具有免疫保护功能。因此研制可刺激产生中和抗体的主要外膜蛋白重组免疫原将是生产防止沙眼衣原体性传播疾病疫苗的第一步。4k型沙眼衣原体主要外膜蛋白基因克隆及表达目前，国内对L2型衣原体的MOMP成功表达罕见报道，一旦能够正确表达MOMP，将为进一步研制L2型衣原体疫苗奠定基础。我们经过两年多的工