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时间:2020-07-04
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1、·猪源嗜性衣原体HB1043株主要外膜蛋白(MOMP)基因的分析及重组表达作者:闫少侠,田永祥,泽文,袁芳艳,郭锐,段正赢,克礼,孟丽,周丹娜,栗绍文来源:《农业科学》2013年第04期 摘要:根据GenBank中衣原体主要外膜蛋白(MOMP)全基因序列设计特异性引物,以临床分离的衣原体病原中提取的衣原体全基因组为模板,利用特异性引物PCR扩增得到MOMP全基因序列。通过BLAST比对,结果显示其与已提交的猪流产衣原体CG1株的MOMP序列(EU531729)有1个碱基不同。根据对测序结果进行信号肽序列预测及切酶位点分析,选用BamHⅠ和SalⅠ双酶切
2、将目的蛋白序列克隆到表达载体pET-28a上,得到重组质粒pET-28a-MOMP。将重组质粒转化入E.coliBL21进行表达,表达产物使用镍离子亲和层析柱进行纯化得到目的蛋白rMOMP。目的蛋白经Western-blot检测,证明其具有免疫学活性。 关键词:猪流产嗜性衣原体;主要外膜蛋白(MOMP);重组表达 中图分类号:S852.67文献标识码:A文章编号:0439-8114(2013)04-0949-04 CloningandExpressionofMajorOuterMembraneProteinofChlamyd
3、ophilaClinicalStrainHB1043fromSwine YANShao-xia1,2,TIANYong-xiang1,LIUZe-wen1,YUANFang-yan1,GUORui1,DUANZheng-ying1, YANGKe-li1,MENGli1,ZHOUDan-na1,LIShao-wen2 (1.InstituteofAnimalHusbandryandVeterinary,HubeiAcademyofAgriculturalSciences,Wuhan430064,China;2.College
4、ofAnimalScienceandTechnology,HuazhongAgriculturalUniversity,Wuhan430070,China) Abstract:Chlamydophilawasanobligateintracecullarparasitesandcouldinfecthumanandmultipleanimals.AccordingtothepublishedcompletenucleotidesequenceofChlamydophilamajoroutermembraneprotein(MOMP)intheGenBa
5、nkandthewholegenomeofChlamydophilaisolatedfromclinicalsamples,thewholegenomesequenceofMOMPgenewereobtainedbyPCR.ThePCRproductwassequencedandblastedwiththecommittedMOMPsequence(EU531729)fromstrainCG1ofswineChiamydophilaabortus.TheresultsshowedthatithadonebasedifferentfromtheCG1strain.Th
6、eextinctionenzymessitesBamHⅠandSalⅠwereselectedforcloningtheMOMPsequencetothepET-28a.TherestructuringplasmidpET-28α-MOMPwerethentransferedintoE.coliBL21andexpressed.ThetargetproteinrMOMPwaspurifiedbytheNiSepharose6FastFlowandprovedwithimmunocompetencebyWestern-blot.Word文档· Keywo
7、rds:Chlamydophila;majoroutermembraneprotein;recombinedexpression 衣原体是一类细胞专性寄生的、大小介于细菌和病毒之间的革兰氏阴性微生物。衣原体感染在世界围均有流行,是一种能够引起人和动物患病的人畜共患病原体。依据衣原体核糖体rRNA的序列比对以及多态性限制性酶切位点的分析,将衣原体科分为衣原体属和嗜性衣原体属。 嗜性衣原体属包含鹦鹉热嗜性衣原体、流产嗜性衣原体、肺炎嗜性衣原体、家畜嗜性衣原体、猫嗜性衣原体以及豚鼠嗜性衣原体[1]。其中,危害最大的病原体主要是流产嗜性衣原体
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