电穿孔转化沙眼衣原体建立衣原体载体实验研究

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1、华中辩技大学辩济医学院电穿孔转化沙眼衣原体建立衣原体载体实验研究华中科技大学同济医学院附属协翻医院妇产辩硕士学位申请者导雾雾周隽李红发教授摘要髫她；逶过电穿孔将重缝溪粒导入到沙鼹衣蒹体(cl>中，势由cT携带进入真核宿主细胞中，观察重组质粒在宿主细胞中的遗传、表达，探索建立沙眼衣原体载体憋方法和思路，为疾瘸腿基因治疗奠定基础。方法：分别爱2．5kV帮l。5kV邀压电击经电击感受态铡各酸CT和重组pECFP．C1／U6．2质粒的混悬液，扩增电击过的CT，观察重组pECFP。C1／U6—2瘊粒标记基因产物——绿色荧光蛋白(GFP)的表达

2、，并用PCR方法检测重组基因插入序列在是否在经电击的CT中存在。结鬃：经电蠢瓣CT扩增培养48h后，翻置荧光鑫辙镜麓察来华中辩技大学溺济医学院见在宿主细胞中有绿色荧光。提取经电击转化CT的基因组，酶切后PCR扩增重组的pECFP-C1质粒插入序列，可见2．5kV电击组中质粒插入序列存在。研究结论：CT能够耐受电击感受态制备及电击过程，2．5kV电压电击转化可将外源质粒导入电击感受态的cr中，进入CT的外源覆粒隧CT～超避孳亍遗传复利，毽未发现钤源矮蕴在CT中表达的证据。为制锯以CT为基础的载体系统提供了试验依据和初步的试验方法，并建

3、立了将外源性大分子物质导入CT的方法模型。关键淘：电穿孔沙眼衣蒙体载镩华中科技大学『司济医学院顾：L学位论文ResearchonEIectroporationTransfectionChlamydiaTrachomatistoBuildVectorofChlamydiaMasterCandidate：ZhouJunTutor：Prof．LiHong—faDepartmentofObstertricsandGynecology,TongjiMedicalCollegeAffiliatedUnionHospital，HuazhongUn

4、iversityofScienceandTechnologyAbstractObjective：InordertostudythefeasibilityofelectroporationintroductionforeignDNAofplasmidintochlamydiatrachomatis(CT)fortransfectionandapproachnewcarriersystembasedonCTwhichcancarryforeignDNAorplasmidintoeucaryoticcell，tolaythefundati

5、onofGenetherapyMethods：Electricpulsesofintensityof2．5kilovoltsand1．5kilovoltspercentimeterwereputonthesuspensionofCTserotypeDandtheplasmidpECFP—C1／U6—2．AftertheelectrotransformationweculturetheCTinHelacell，toproliferatetheCTandtheplasmid．AtthesametimeculturetheCT,weobs

6、ervewhetherthegreenfluorescentprotein(GFP)geneexpressintheCTorintheHelacell．Atlastwe3华中科技火学同济医学院顺：

7、二学位论文amplificatetheinsertionsequencesinpECFP··C1／U6·-2totestwhethertheplasmidwereelectrotransformedintoCTResults：TheplasmidpECFP--C1／U6--2wereelectrotransformedintoCTunde

8、rthe2．5kilovoltselectricpulses，andexiststablyforseveralgenerations．WedonotfoundGFPbothinCTandinHelacellConclusion：WebuildthemodeltotransferforeigngaintmolecularsubstanceintoCT．ElectrotransformationcantransportforeignDNAintoCT．Wedonotfoundevidencethatplasmidwithexpresso

9、randpromoterofE．colicanexpressinCTvectorKeywords：electroporationtransfection，chlamydiatrachomatis，4华中科技大学I司济医学院硕：

10、=学位