沙眼衣原体实验诊断技术进展论文

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1、沙眼衣原体实验诊断技术进展论文1907年，捷克学者Halberstaeder和Proydiatrachomatis,Ct)与人类疾病关系密切，且目前已成为许多国家和地区常见的性传播疾病病原体，日益引起人们重视。Ct感染的诊断决定于病原学检查。随着检测技术的进展，Ct感染的诊断也不断地发生变化。我们就此领域的研究进展作一简述。一、细胞生物学检测方法1.涂片镜检：Ct寄生于柱状上皮细胞内形成包涵体，取宫颈或尿道标本涂片后.freelydiazyme、ID-EIA、PharmaciaChlamydiaEIA等多种市售诊断试剂盒可供使用。其敏感性从64%到98%，特异性从93%到98

2、%［9］。通常认为，其敏感性在高危人群中可得到满意结果，而在新近感染及治疗监测中敏感性明显下降。EIA的优点在于方法简便、操作自动化，适于短时内大批量标本的检测。但其最大缺点在于，与其他常见微生物产生交叉反应，如金黄色葡萄球菌、A群及B群链球菌、淋病奈瑟菌、醋酸钙不动杆菌、肺炎克雷伯菌及其他革兰阴性细菌，从而使特异性达不到100%。国外此法多用于高危人群的筛查，国内应用较少。三、分子生物学检测方法1.直接检测核酸的技术（即基因探针技术）：此技术利用核酸分子的复性原理，用特定的标记探针去检测标本中的靶核酸。最初为放射性标记，后来逐渐发展为酶或化学发光试剂标记。目前有美国圣地亚哥

3、Gen-Probe公司生产的发光标记基因探针试剂盒PACE-2。与培养法相比，Gen-Probe方法的敏感性和特异性分别为73%～96%和98%～99%［9］，尚无培养法敏感和特异。由于此法成本高、步骤繁琐，随着核酸扩增技术的出现，基因探针技术也就失去了其应用价值。2.核酸扩增技术：继基因探针技术之后，很快出现了核酸扩增技术，这些技术包括（1）靶DNA或RNA的扩增，如聚合酶链反应(PCR)，基于转录的扩增(TBA)，自动维持序列扩增(3SR)以及链置换扩增(SDA)；（2）探针扩增，如连接酶链反应(LCR)，Q-β复制酶的扩增；（3）杂交后信号的扩增，如复合探针和分支DNA

4、探针。其中研究和使用较多的是PCR和LCR，尤其是PCR技术，有学者认为其将对感染诊断引起革命性变化［10］。PCR属于一种核酸体外扩增技术，用寡核苷酸指导的DNA合成的重复循环来实现对靶核酸序列的扩增。PCR每个循环包含变性、退火、延伸3个步骤，在不到2小时内，经过30个循环，在理论上可将最初的靶DNA扩增109倍。最后可用凝胶电泳或探针杂交检测扩增的DNA。由于先将标本中的核酸特异成分先行扩增复制再行检出，其敏感性较直接检测核酸大大提高。目前国内外用于构建引物的衣原体DNA有7.5Kb质粒、MOMP基因（omp1）和16SrRNA基因。诊断试剂盒AMPLICORCtPCR

5、已通过食品与药品管理局(FDA)的审批，其扩增靶序列即为质粒DNA。许多研究都已表明，PCR较培养法和EIA法都要敏感［7，9，11］，而且PCR对于有症状或无症状人群同样敏感［3］。但基于不同引物的PCR的敏感性仍有所不同。Roosendaal等［12］的研究表明，质粒引物PCR最敏感，omp1引物PCR最不敏感，16SrRNA基因引物PCR介于两者之间。这可解释为在每个衣原体细胞中DNA拷贝数不同的缘故。虽然omp1引物PCR敏感性较质粒PCR为差，但omp1引物PCR扩增的特异性好，而且Palmer等［13］报道通过巢式PCR，经过2轮扩增，同样能够达到质粒引物PCR的

6、敏感性。并且omp1扩增后，利用限制性片段长度多态性（RFLP）还可对Ct进行基因分型［14］，这对流行病学调查具有重要意义。PCR技术不但能检测尿道或宫颈拭子标本，而且可以采用尿标本进行检测。但尿中可能存在扩增的抑制物，从而影响PCR的敏感性。Verkooyen等［15］报道将标本进行预先的加热处理或使用2SP转运培养基可显著降低AMPLICORCtPCR对抑制因子的易感性。将临床标本加热处理后10倍稀释亦可在很大程度上防止这种抑制。除了尿中的抑制物会影响PCR的敏感性，导致出现假阴性结果外，PCR的另外一个缺点是由于其本身技术原理的原因，容易造成假阳性污染。近年亦有学者应

7、用LCR检测Ct。LCR属于一种探针扩增技术，是依赖靶核酸序列的寡核苷酸探针的连接技术。AbbottLCR-CT诊断试剂盒也已通过FDA的审批。同PCR相比，由于使用两对引物，用LCR检测Ct感染，具有更高的敏感性和特异性［16］。但连接酶价格昂贵，难以在临床普及应用，仅适用于科研，且国内应用较少。最新发展的扩增试验是Gen-Probe公司的扩增Ct的转录介导扩增试验（TMA），扩增并检测Ct的rRNA。TMA的一个优点是每个感染细胞中有大量的rRNA。而且操作步骤简便，只是一个恒温过程，不需要变换温度