浅谈沙眼衣原体实验诊断技术进展

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1、使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.docin.com/mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻浅谈　　1907年，捷克学者halberstaeder和prowazek发现沙眼包涵体，1956年我国学者汤飞凡等分离沙眼衣原体成功，引起了全世界对其进行广泛深入的研究［1］。沙眼衣原体(chlamydiatrachomatis,ct)与人类疾病关系密切，且目前已成为许多国家和地区常见的性传播疾病病原体，日益引起人们重视。ct感染的诊断决定于病原学检查。随着检测技术的进展，ct感染的诊断也不断地发生变化。我们就

2、此领域的研究进展作一简述。　　一、细胞生物学检测方法　　1.涂片镜检：ct寄生于柱状上皮细胞内形成包涵体，取宫颈或尿道标本涂片后，通过碘染色或姬姆萨染色等可见细胞内包涵体。但由于泌尿生殖道中完整细胞较少，以及细胞内包涵体脆性较大，从而造成敏感性过低，不推荐用于临床标本的检查，仅限于ct的鉴定［2］。　　2.细胞分离培养法：由于ct的专性细胞寄生性，一般培养法不能使其生长，只有在活的细胞内才能增殖、复制。组织细胞培养法分离ct多采用mccoy细胞或13使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.docin.com/mt

3、l168168，分享文档快乐生活快乐无阻hela-229细胞（国内也有报道采用hep-2细胞），染色后在显微镜下观察细胞内有无包涵体。早期曾试图用尿标本做培养，但阳性率甚低［3］，只能采用尿道或宫颈拭子。培养法的特异性为100%，但敏感性一般低于100%，且各个实验室操作步骤有所不同，没有标准化，这可能有助于解释对同一种非培养方法的不同评价。组织细胞培养法是诊断ct感染的“金标准”［4］，但是由于分离培养操作复杂，技术及设备要求高，所需时间长，且敏感性受标本采集、运送、保存等的影响较大［5］，加上国内很多医院不具备细胞培养条件，

4、因而不适于临床应用，多用于科研和疑难病例的终鉴定。　　二、免疫学检测方法　　1.直接荧光抗体测定（dfa）：将针对ct的单克隆抗体用荧光标记，与标本中的13使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.docin.com/mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻ct结合后，荧光显微镜检查就能见到发荧光的原体（ebs）。针对脂多糖（lps）的抗体荧光不够亮，且染色不匀；而针对主要外膜蛋白（momp）的抗体荧光更亮，且减少非特异染色［6］。dfa不象培养法必须存在有活力的ct，但其敏感性受人群感染率的影响，且有判定结果

5、带有主观性，荧光易淬灭，不适于检测大量标本等缺点。多数学者报道其特异性较高，hallsworth等［7］报道可达100%，因此在科研中常被用作确证试验。由于此法操作简便、费用低廉，在不具备分子生物学试验条件的医院，可用以检测临床标本［8］，但也需经验丰富者操作。　　2.酶免疫测定（eia）：用酶标记的单克隆或多克隆抗体检测ct的lps或momp，酶反应生成有色产物，用酶标仪进行测定。目前有chlamydiazyme、id-eia、pharmaciachlamydia13使用前删除此我爱浪漫樱花文档主页：http://www.do

6、cin.com/mtl168168，分享文档快乐生活快乐无阻eia等多种市售诊断试剂盒可供使用。其敏感性从64%到98%，特异性从93%到98%［9］。通常认为，其敏感性在高危人群中可得到满意结果，而在新近感染及治疗监测中敏感性明显下降。eia的优点在于方法简便、操作自动化，适于短时内大批量标本的检测。但其最大缺点在于，与其他常见微生物产生交叉反应，如金黄色葡萄球菌、a群及b群链球菌、淋病奈瑟菌、醋酸钙不动杆菌、肺炎克雷伯菌及其他革兰阴性细菌，从而使特异性达不到100%。国外此法多用于高危人群的筛查，国内应用较少。　　三、分子生

7、物学检测方法　　1.直接检测核酸的技术（即基因探针技术）：此技术利用核酸分子的复性原理，用特定的标记探针去检测标本中的靶核酸。最初为放射性标记，后来逐渐发展为酶或化学发光试剂标记。目前有美国圣地亚哥gen-probe公司生产的发光标记基因探针试剂盒pace-2。与培养法相比，gen-probe方法的敏感性和特异性分别为73%～96%和98%～99%［9］，尚无培养法敏感和特异。由于此法成本高、步骤繁琐，随着核酸扩增技术的出现，基因探针技术也就失去了其应用价值。　　2.核酸扩增技术：继基因探针技术之后，很快出现了核酸扩增技术，这些

8、技术包括（1）靶dna或rna的扩增，如聚合酶链反应(pcr)，基于转录的扩增(tba)，自动维持序列扩增(3sr)以及链置换扩增(sda)；（2）探针扩增，如连接酶链反应(lcr)，q-β复制酶的扩增；（3）杂交后信号的扩增，如13使用前删除此我爱浪漫樱花文档