沙眼衣原体momp串联表位蛋白疫苗的保护作用研究

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1、万方数据论文题目：迦g基壅厦佳．丛Q丛里皇毯麦焦蛋自瘗苴的堡控佳目的班究答辩委员会主席：迕雪桓教援．．虫国医堂科堂院答辩委员会成员：奎塞娃教援湿趔医科太堂篚囱田副教攫湿刿匡型太堂万方数据温州医科大学硕士学位论文目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1EnglishAbstract．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯⋯⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．4英文缩写词解释⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．8前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．10第一部分HBeAg(MIR)-MOMP串联表位蛋白的原核表达⋯⋯⋯⋯12材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯12结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．，23分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．3l第二部分HBoAg(MIR)一CtMOMP串联表位蛋白免疫原性研究⋯一34材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34结果

3、⋯⋯⋯⋯39分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯42第三部分HBcAg(Mm)．MOMP串联表位蛋白的免疫保护性研元⋯⋯44材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49分析与讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯52小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯58致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯59综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．60万方数据温州医科大学硕士学位论文沙眼衣原体MOMP串联表位蛋白疫苗的保护作用研究中文摘要乙肝病毒核心抗原(HepatitisBCoreAntigen，HBoAg)可以在原核表达系统表达并能形成病毒样颗粒(VirusLikeParticles，VLPs)，非常适合作为表位疫苗的载体。位于其衣壳表面刺突顶端的主要免疫显性区域(Majo

5、rImmunodominantRegion，MIR)允许一定程度的外源基因插入，而且可以将外源序列高密度并重复地暴露在其表面，诱发强烈的特异性细胞和体液免疫反应。本研究在以往研究的基础上，选择CtMOMP免疫优势区的多个细胞表位，构建成串联表位，以HBoAg(MIR)为载体，通过原核表达串联表位蛋白，进行免疫保护作用研究。目的：【1】构建以HBoAg(MIR)为载体的含E血清型CtMOMP串联表位基因的重组质粒，并在大肠杆菌表达系统进行蛋白表达；【2】研究HBoAg(MIR)．MOMP串联表位蛋白的免疫原性，包括细

6、胞免疫和体液免疫；【3】研究HBoAg(MIR)．MOMP串联表位蛋白对小鼠生殖道E血清型。攻击的免疫保护作用。方法：【l】PCR扩增出E血清型CtMOMP表位基因，插入到载体HBo的M瓜区，构建3个重组质粒即pET21WHBoAg(MIR)一Epil、pET21a／HBoAg(MIR)-Epil／Epi2、pET21WHBoAg(MIR)-Epil／Epi2／Epi3(以下蛋白简称MIR-Epil、MIR-Epi(1+2)、MⅡ己·Epi(1+2+3))。经PCR鉴定、DNA测序验证正确后，将3个重组质粒及pET

7、21a／I-IBc(MIR)(以下蛋白简称MIR)转化入Rosetta菌株中，IPTG诱导表达蛋白，经Ni．NTA亲和层析法纯化，经WB检测成功后，进一步电镜观察进行鉴定：【2】选取6-8周龄的BALB／o雌性小鼠，随机分为7个组，分别为CtMOMP(Epil)合成肽、MIR-Epil、MIR-Epi(1+2)、MIR-Erli(1+2+3)组，PBS和MIR组为阴性对照，灭活。组为阳性对照，每组10只。分别在1、3、5w时，皮下多点注射免疫，共免疫3次；0w、2w、4w、6w、8w时，断尾取血分离血清并采集生殖道

8、分泌物，酶联免疫吸附测定(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay，ELISA)分别检测cf特异性IgG和IgA。末次免疫后2w，用CtMOMPCTL合成肽孵育小鼠脾细胞：以P815细胞为靶细胞，用LDH法检测试剂盒检测CTL的杀伤活性；万方数据温州医科大学硕士学位论文【3】小鼠末次免疫后2周，以1×106IFU的E血清型Cf对小鼠生殖道