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1、基因枪轰击转化棉花茎尖分生组织影响因素的探讨2BRI‰RBOBEJU-
2、Ilfl∞华北农?2006,21(增刊):32.36基因枪轰击转化棉花茎尖分生组织影响因素的探讨李秋伶,王省芬,马峙英,张桂寅(河北农业大学河北省作物种质资源重点实验室,河北保定071001)摘要:以农大KB18的茎尖分生组织为受体材料,利用基因枪轰击法将植酸酶基因(P^)导入棉花茎尖分生组织,经过再生,筛选,分子检测等过程获得若干转基因植株.通过研究碳源,外源激素,活性炭,轰击距离和轰击次数以及茎尖的恢复培养与抗性筛选等,建立了较为完善的
3、棉花基因枪茎尖转化体系.结果表明,植株再生率与再生培养基的成分,如激素的有无,活性炭的含量和碳源等有关,轰击距离以及筛选程序中卡那霉素的起始筛选时间,筛选浓度和浓度梯度等因素对转化周期和转化率有直接影响.关键词:棉花;茎尖分生组织;遗传转化;基因枪轰击;植株再生中图分类号:S562文献标识码:A文章编号:1000—7091(20o6)增刊一0032—05InfluencingFactorsofShootApicalMeristemTransformationviaParticleBombardmentinCot
4、tonLIQiu-ling,WANGXing-fen,MAZhi-ying,ZHANGGui-yin(AgriculturalUniversityofHebei,KeyLaboratoryofCropGermplasmResourcesofHebeiProvince,Baoding071001,China)Abstract:Thephytasegene(Phya)wastransformedintoshootapicalmeristemsofNDKB18viamicmprojectile—bombardment
5、.Sometransgenicplantswereobtainedfromthesebombardedexplantmaterials.Animprovedtransformationsystemofmeristemviagene-gunbombardmentwasestablishedbasedonsomeinfluentialfactorsinvestigated.Theresultsshowedthattheratiosofregeneratedplantwererelatedwiththeingredi
6、entsofregenerationmedium,suchashormones,activecharcoalanddifferentsugars.Theefficiencyoftransgenicplantandtransformationcyclewereaffectedbytheborn—bardmentdistance,theinitiativetimeofselection,theinitiativeconcentrationandconcentrationgradientsofkanamycinint
7、heprocessofselection.Keywords:Cotton;Shootapicalmeristem;Genetictransformation;Gene-gunbombardment;Plantregeneration目前棉花转基因方法很多,有花粉管通道法,农杆菌介导法和基因枪轰击法等,前两种方法分别受季节和受体基因型的制约,使其应用受到一定的限制.基因枪法是依赖高速度的金属微粒将外源基因引入活细胞,没有宿主范围的限制,靶受体类型广泛,是继农杆菌介导法之后应用最广泛的一项遗传转化技术[卜引.目前,
8、水稻,玉米,小麦等_50J多种作物采用基因枪转化技术获得了转基因植株,但在双子叶植物上应用较少.对棉花基因枪转化技术的研究大多采用茎尖分生组织为转化受体,通过器官再生完整植株的方法,成功获得了转基因植株[n..o本研究以陆地棉品种农大KB18的茎尖分生组织为受体材料,对影响棉花茎尖分生组织再生培养和基因枪轰击转化的因素进行探索,以期为建立有效的,较为完善的棉花基因枪转化体系提供依据.1材料和方法1.1供试材料1.1.1棉花品种供试材料为陆地棉品种农大收稿日期:2006—09—20基金项目:国家973项目(200
9、4CB117302—1);河北省科技厅博士资金项目(04547001D一2)作者简介:李秋伶(1981一),女,河北宁晋人,硕士研究生,主要从事棉花遗传转化工作;马峙英为通讯作者.增刊李秋伶等:基因枪轰击转化棉花茎尖分生组织影响因素的探讨33KB18,由河北农业大学棉花遗传育种研究室提供.1.1.2质粒DNA所用质粒含有NPTlI基因和Phya基因,由南开大学生物技术研究室李明刚教授构
