玻璃粉创伤棉花茎尖分生组织遗传转化的研究

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1、第31卷第6期石河子大学学报(自然科学版)Vo1．31No．62013年12月JournalofShiheziUniversity(NaturalScience)Dec．2013文章编号：10077383I2013)06—0736—06玻璃粉创伤棉花茎尖分生组织遗传转化的研究尹秀，游义霞，张维，黄先忠，崔百明(石河子大学生命科学学院／农业生物技术重点实验室，石河子832003)摘要：：评估玻璃粉创伤棉胚茎尖分生组织的转化效率及初步建立其遗传转化体系。高速涡旋的玻璃粉创伤棉胚茎尖分生组织，利用农杆菌介导法将报告基

2、因gusA导人棉花，GUS组织化学染色后观察棉胚转化情况，探讨不同转化条件对转化的影响。结果表明：0．2g玻璃粉创伤棉胚，茎尖分生组织的较多细胞被转化，成活12株幼苗，较适宜。涡旋90s转化条件下获得2株GUS阳性苗，涡旋时间越长茎尖分生组织创伤程度越严重，能提高转化效率，但成苗量降低。此外．转化效率受菌液浓度及菌种的影响，OD为0．8的农杆菌LBA4404菌液侵染棉胚，较多细胞能表达gusA的活性且表达水平较高，而被农杆菌GV3101侵染后的棉胚染色效果较差。关键词：棉花；农杆菌介导转化；茎尖；遗传转化中图分

3、类号：S562．035文献标志码：AResearchonGeneticTransformationofCottonShoot—TipMeristemWoundedbyGlassPowderY1NXiu，YOUYixia，ZHANGWei，HUANGXianzhong，CU1Baiming(KeyI．aboratoryofAgrobiotechnology／CoIlegeofIifeSciences，ShiheziUniversity，Shihezi832003，China)Abstract：Thestudyai

4、medtoevaluatetransformationefficiencyofcottonshoot—tipmeristemwoundedbyglasspowderandes—tablishthegenetictransformationsystem．Aftermatureembryoswerewoundedbyhigh—speedwhirlingglasspowder，gusAwastransformedbyAgrobacterium—mediatedmethod．Thedifferentfactorstha

5、taffectedtransformationfrequencywerediscussedbytheobservationofGUShistochemicalassay．Theresultsshowedthatthesuitableamountofglasspowderwas0．2g，withmorecellsofshoot—tipmeristemtransformedand12seedlingsobtained．Whenthevortextimewasupto90s，twoGUS-positiveplants

6、wereobtained．Itshowedthatshoot—tipmeristemswerewoundedmoreseverelywiththeextendedvortextime．Transfor—mationefficiencywasimproved，butthenumberofseedlingswasless．Additionally，transformationefficiencywasaffectedbytheconcentrationandthestrainofAgrobacteriumtumef

7、aeiens．MorecellscouldhighlyexpressedgusAgeneactivityafterinfestedbyAgrobaeteriumtumefaeiensLBA4404withOD㈣一0．8，whileAgrobacteriumtumefaciensGV3101waslesseffective．Keywords：cotton；Agrobaeterium—mediatedtransformation；shoottip；genetictransformation棉花是一种全球性经济作物，

8、也是我国重要的地对植物进行定向改良且渗透到植物育种的各个方经济和战略物资]。新疆是棉花主要种植区，其种面¨4]。利用该技术已培育出了抗病]、抗虫]及抗植业和加工业是该地区国民经济发展的支柱产除草剂等转基因棉花品种。业。虽然常规作物育种推动棉花产业发展，但是近年来利用农杆菌介导法导人外源基因改良棉在培育优良品种方面还有很多限制因素。基因工花性状，通常需要经过组织培养和植株再生的方法程技术