《茎尖分生组织培养》PPT课件

《《茎尖分生组织培养》PPT课件》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、4茎尖分生组织培养一、概念和意义1.概念茎尖分生组织培养：指对不超过0.1mm的茎尖或几十微米的茎尖进行的培养。特点：可获无病毒苗，操作困难，成苗时间长。普通茎尖培养：对几毫米至几十毫米长的茎尖、芽尖及侧芽的培养。操作技术简单、易成活、成苗时间短、繁殖速度快。2.意义茎尖培养在园艺植物离体培养中最常见，可快速繁殖无性系、培养无病毒苗、品种改良。二、茎尖分生组织培养一般方法1.材料的制备健壮枝梢去除叶片分成1-2cm自来水冲洗消毒75%的酒精30秒0.1%升汞或20倍次氯酸钠消毒8-10min无菌水修剪剥离茎尖，通常切割下顶端0.2~0.5m

2、m叶原基的茎尖（无菌水）接种。2.培养基多为MS培养基及其改良配方，还有White、B5、Heller、Gautheret等。3.培养条件（1）温度：26℃~28℃（2）光照：光培养的效果通常比暗培养好。（3）湿度：与其他器官培养相似。4.3脱毒苗的培育和病毒检测一、脱毒苗的培育（一）脱毒苗培育的意义全世界已发现植物病毒有近700种，植物病毒病严重地影响果树、蔬菜、花卉、林木等植物的生长，造成产量降低，品质变劣，其危害仅次于真菌病害。受病毒浸染的植物终身带毒，目前尚无药物可以治愈。通过茎尖分生组织脱毒、热处理脱毒等方法可脱除植物体内病毒，恢

3、复植物原有特性。（二）热处理脱毒1.原理热处理脱毒又叫热温处理或热疗法。其基本原理是一些病毒对热不稳定，在高于常温的温度下（35-40度）既钝化失活。2.热处理法有：温汤处理（热水浸泡）和热风处理两种。具体方法：第一，热水浸泡处理，适用于切下的材料，在50度左右的温水中浸渍数分钟至数小时，方法简便易行但材料易受伤。第二，热风处理，将生长的盆栽植物移入室内或生长箱内，处理温度因植物种类、生理状况而异。一般为35~40度，短则几十分钟，长达数月。（三）茎尖培养脱毒1.茎尖培养脱毒的原理（1）病毒在植物体内的分布病毒浓度不同，离尖端越远病毒浓度越

4、高。茎尖或根尖离体培养便可获得无病毒再生植株。必须指出的是，所谓无病毒，只是相对的，不是绝对的。（2）茎尖大小与脱毒茎尖外植体的大小与脱毒效果成反比。茎尖分生组织不能合成自身需要，生长素，细胞分裂素，因而带叶原基的茎尖生长快，成苗率高。因此茎尖越大培养成活率越高。因此对不同植物脱毒适宜的茎尖大小不同。2.茎尖培养脱毒的方法（1）取样与消毒可直接选定的植株上取顶芽进行消毒接种。采顶芽与侧芽消毒接种。消毒方法是：剪取顶芽梢段3、5厘米，剥去大叶片，用自来水冲洗干净，在75%酒精中浸泡30秒左右，用1%-3次氯酸钠或5%-7%的漂白粉溶液消毒10

5、-20分，最后用无菌水冲洗材料4-5次。（2）接种材料置10～40倍的双筒解剖镜下，解剖刀切取0.1～0.3mm带有1～2个叶原基的茎尖，接种到培养基上。（3）培养接种后材料置25+2℃，光照度1500-5000LX，每日光照10-16h条件下培养。但一般光照培养比暗培养效果好。其间应更换新鲜培养基。提高培养基中BA的浓度可形成大量从生芽。3.培养基与培养方式：（1）培养基：常用MS，White等培养基。（2）培养方式：茎尖培养一般采用半固体培养基（四）、其他脱毒方法1.热处理结合茎尖培养脱毒2.微体嫁接脱毒微尖嫁接技术（micrograf

6、tingshoot-tip），指在人工培养基上培养实生砧木，嫁接无病毒茎尖（0.14-1.0mm,带3-4个叶愿基）以培养脱毒苗的技术。主要脱毒程序是：无菌砧木培养茎尖准备嫁接嫁接苗培养移植。3.抗病毒药剂脱毒二、病毒检测主要是对脱毒苗的鉴定。方法有1.直接测定法：直接观察待侧植株生长状态是否异常，茎叶上有无特定病毒引起的可见症状，从而可判断病毒是否存在。2.指示植物法：将一些对病毒反映敏感，症状特征显著的植物作为指示植物（鉴定别寄生），用以检验待测植物体内特定病毒的存在。即指示植物法。常用鉴定指示植物有苋科植物千日红和藜属笕色藜。特点：条

7、件简单，操作方便，故一直沿用至今，仍为一种经济而有效的鉴定方法，只能测出病毒的相对感染力。3.抗血清鉴定法植物病毒是由核酸和蛋白质组成的核蛋白复合体，因而也是一种抗原，注射到动物体内即产生抗体，抗体存在于血清之中，称为抗血清。由于不同病毒产生的抗血清都有特异性，用特定病毒的抗血清来鉴定该种病毒，具有高度的专一性和特异性，几分钟至几小时即可完成，方便简易，为常用方法之一。三、无病毒苗的保存和繁殖（一）无病毒苗的保存无病毒植株并不是有额外的抗病性，它们有可能很快又被重新感染。所以一旦培育得到无病毒苗，就应很好保存，这些原原种或原种材料保管得好可

8、以保存利用5～10年。1.隔离保存通常无病毒苗应种植在隔虫网内，使用300目，即网眼为0.4～0.5mm大小的网纱，也可用盆栽钵，可以防止蚜虫、叶蝉、土壤线虫进入。栽培用的土壤也