甘蔗茎尖脱毒组织培养技术研究

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1、甘蔗茎尖脱毒组织培养技术研究　　摘要主要采取不同的热处理、接种、茎尖解剖等阶段设计对提高甘蔗的茎尖膜毒组织培养的成功率进行研究，结果表明，对不同的甘蔗品种进行热处理时水浴温度和时间不同；在甘蔗的茎尖解剖前，先用75%的酒精做茎尖消毒，能够在很大程度上减少茎尖培养过程中出现的各种污染问题；接种时，将茎尖放置在浓度为150mg/L的PVP溶液或者无菌水中浸泡15min可减少酚污染，且150mg/L的PVP对甘蔗接种具有促进作用。其中对于活性炭的使用要更加慎重，需要进一步研究。　　关键词甘蔗；茎尖；脱毒

2、；组织培养技术　　中图分类号S566.1；Q813.1文献标识码A文章编号1007-5739（2016）01-0101-026　　甘蔗与其他的很多农作物相似，是一种无性繁殖的作物，它主要是利用自身的茎尖来实现自我繁殖，但是经过连续的种植以后很容易出现枝干感染以及体内的病毒积累。有研究表明所有健康的甘蔗品种在种植5年以后必然会感染宿根矮化病。即使是十分优良的甘蔗品种经过多年种植以后，也会受到外界病毒的感染，这在很大程度上影响其优良品种的特性，最终影响整个甘蔗生产的实际产量。在很长一段时间甘蔗的茎尖脱

3、毒培养技术一直是困扰着生物科研人员的问题，在过去的研究中，一般都采取热处理同时结合茎尖分生组织培养的方法进行甘蔗的脱毒，但是由于时间较长，在培养中容易出现污染以及褐变等问题会降低培养的成功率。基于这种情况笔者采取新的甘蔗茎尖脱毒培养技术来提高甘蔗的生产率[1-2]。　　1材料与方法　　1.1试验材料　　选择生长期为6～8个月的果蔗拔地拉和糖蔗（ROC22），以上品种在桂西北地区均有种植。　　1.2试验方法　　1.2.1热水处理。分别在果蔗拔地拉和糖蔗（ROC22）的甘蔗地里随机选取40个形状大小相

4、同的单芽茎断，每个茎断切成三等分，每种样品分3组，每组40个。将这3组分别采取不同的处理方法，其中2组分别放在50、52℃中浸泡相同的时间（30min），而另外一组不做任何处理（CK）。然后取出充分晾干，进行培养（采用新沙），培养温度保持在38～40℃，然后每天进行适当浇水[3-4]。经过7d后详细统计生长和出牙情况。　　1.2.2接种前处理。在沙床上选择长度为10～15cm的甘蔗幼苗，用清水将幼苗上的泥沙清除干净，同时避免损伤到幼苗，晾干后再等分成3组，为了更好地研究，需要每组15株，然后放到超

5、净工作台上进行处理，第1组采用75%酒精处理，第2组利用无菌水处理，第3组不采取任何的处理。对每组分别进行茎尖皮剥离，剥离到外皮的最后一层，然后切片，长度在1～2mm之间，最后全部放到已经灭菌的培养皿中。等到7d后记录甘蔗幼苗污染率和生长情况。　　1.2.3减少酚污染的处理。在第1组操作基础上对茎尖采取4个不同的处理方法。第1种是直接放到无菌水中浸泡；第2种是放到浓度为150mg/L的PVP溶液中持续浸泡156min，然后将这2种方法处理后的茎尖放到普通的培养基中进行培养；第3种是将没有经过任何浸

6、泡茎的尖接种到含有碳粉的培养基中；第4组作为对照组不进行任何处理直接放在普通培养基中培养。观察这4组茎尖的生长情况记录污染、褐变情况。　　1.2.4培养基的配置。普通培养基配置MS+0.5mg/L6-BA+0.01mg/LNAA+30g/L蔗糖，以上作为基本培养基，其他需要作对照的组加上对应物质即可，对以上培养基每瓶加上4层的滤纸，每瓶按8～10mL加入适当的液体培养基，要保证滤纸不被浸没。　　1.2.5培养方式。培养容器选用透明玻璃瓶，容积以200mL为宜，所有处理都要放在光照强度为1200～1

7、500lx、温度在25～30℃、相对湿度达到56%～80%的培养室中进行10～12h的培养[5-6]。　　2结果与分析　　2.1不同温度热水处理对甘蔗出芽率的影响　　从表1可以看出，ROC22在50℃和52℃时，其出芽率均为77.5%，但是不做任何处理时其出芽率可以达到100.0%，这说明了进行水浴会影响到其出芽率，但影响的程度不大。但是果蔗的出芽率受到的影响比较大，在50℃的水浴中出芽率是50.0%，升高2℃后出芽率降为25.0%，不进行任何处理的出芽率为90.0%。其主要原因是，果蔗的茎尖组织

8、与ROC22相比更嫩，受到的温度影响更大。进行水浴时茎尖的组织会被烫死，导致出芽率下降。　　2.2不同前处理对甘蔗茎尖培养污染率的影响6　　通过表2观察发现，以上2个品种没有经过前期处理的茎尖其污染率都达到了50%，而采用酒精或者是无菌水处理后的茎尖其污染率都有明显的下降。经过处理后的2种对比发现经过酒精处理后的污染率明显较低，这说明酒精处理后的茎尖具有消毒作用。作为茎尖解剖中其操作过程是非常细致的，操作人员需要一层层解剖，在解剖中越彻底酒精达到的部位就越广，同时，如果不进行消毒处