基因枪轰击成熟花粉粒转化玉米的研究.pdf

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1、玉米科学(""#H!*&*’!(#a(@"*!L89=>FS8Z[FGU<7YG<>Y

2、56和456$789:;<=>检测"初步确定%"&$基因已导入玉米基因组$饲虫实验结果表明"转化植株具有较强的抗虫性$关键词!玉米#基因转化#基因枪#花粉粒中图分类号!?@-#7#!*,"*#,*文献标识码!A!"#$%&’()*+,)’-(+.%)/!"#$0&)&%)"(1,%2&345%(6%’"%7’5(.3,+8.&)"(-9(66&)!(BCDEF>$/+!,’(")*+,(-+./01.2.34561).7.-38-19(*:1+45;)-7.-3!!-""*H5;G>FM(,;(")*+,(-+./01.:<1(-<()

3、-701.+(<=-.2.345;)21)-8-19(*:1+4./&(<=-.2.345;)21)-!!&"(.H5;G>F):3’"+,7"NO;<;FPQ<<>R:8/FGU<:;=890;V8SS<>:9Q:8ZV8SS<>,O;:PW<=Z9=:;<=PY=<<>8Z2F>F/XYG>F>R/8SZG=/P0<>GYVSF>:PQXFPPFXP

4、8Z456F>R456$789:;<=>,O;<:=F>P0<>GY/FGU<;FPFY<=:FG>R<0=<<8Z=Y<:8Y8=>Q8=<=,;&4<(+$’N[FGU<:=F>PZ8=/F:G8>MG8SGP:GYPQ8/QF=R/<>:M48SS<>玉米是一种重要的粮食和饲料作物"长期以来"!材料与方法育种学家通过常规技术已培育出大量优良品种$利用基因工程手段可以打破物种间和远缘杂交不亲和=>=植物材料性的限制和障碍"自从!%@.年花粉管通道技术开始本实验所用玉米自交系*!-@%*!--%*!".%#!".尝试并使用后"人

5、们发展了多种转化手段’朱生伟和*!"*由大连农科所提供$等"("""#施中华等"!%%-]$例如!将外源EJA滴涂=>?质粒在柱头断面上%人工培养的花粉粒与外源EJA溶液供试质粒为4A4!E$5VOC"由中科院遗传所提混合后授粉%将外源EJA注射入子房等’^!%-"#E

6、验证据$我们通和P:=$过基因枪轰击成熟花粉粒再授粉的方法"进行了大=>@转化操作量的转化实验"将抗虫的!"&$基因导入玉米"为作!"#"!质粒$%&的提取和纯化’参照()*+),+-.’/,物育种提供了一种可重复性强%应用范围广%简单%)0"!112!经济的转化体系$!"#"2基因枪轰击+!]对玉米自交系雄穗套袋(.;后"选取花粉丰收稿日期!("".$!($((富的植株收集花粉"均匀铺于直径为*Y/的培养作者简介!刘丹梅+!%@*$]"女"辽宁丹东人"硕士"从事植物基因工程研究$O

7、RSG9RF>/0钨粉+直径为!,"//]溶2=玉米科学(-卷于!"#无水乙醇中!在旋涡振荡器上振荡!$%定性滤纸及一叠裁好的吸水纸!最后压上MSS5以"&’后离心尽量移去乙醇!再用无菌水洗去残留乙上的重物"注意不要倾斜及移动位置"醇!加入(")无菌水重悬沉淀密闭储存于*+",A.中间换吸水纸2>A次!吸印约2SF",-.制备微弹/01"取微粒重悬液23!)!加入,E.将膜置于杂交盒中!加入煮沸的洗液,S74Y23!)质粒/01,4!56!).溶液!23!)273"896)ZZ:!S7M[Z/Z.2<

8、洗涤两次!每次M"&’":;:92溶液!4