大豆成熟种子胚尖基因枪法转化体系的优化

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1、第３０卷第１期大豆科学Ｖｏｌ．３０Ｎｏ．１２０１１年２月ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥＦｅｂ．２０１１大豆成熟种子胚尖基因枪法转化体系的优化１１１１２１１叶美，张敏，杨素欣，邵群，安海龙，曹子谊，冯献忠（１．山东师范大学生命科学学院，山东省逆境植物重点实验室，山东济南２５００１４；２．山东农业大学生命科学学院，作物生物学国家重点实验室，山东泰安２７１０１８）摘要：以山东省主栽大豆品种“荷豆１２”成熟种子胚尖为材料，探讨了６ＢＡ和潮霉素浓度等因素对基因枪法遗－１传转化的影响，并通过报道基因ＧＵＳ检测了外源基因的表达和整合情况

2、。结果表明：经５ｍｇ·Ｌ６ＢＡ诱导１６ｈ，－１“荷豆１２”胚尖的再生丛生芽数目、丛生芽的伸长速率等综合指标最佳；５～１５ｍｇ·Ｌ的潮霉素多步梯度筛选可以提高转化筛选效率。基因枪转化后的胚尖组织和转基因植株后代的叶片中均可以观察到ＧＵＳ基因的表达；通过分子鉴定证明外源ＧＵＳ基因插入到转基因后代的基因组中。关键词：大豆；成熟种子胚尖；基因枪法；遗传转化中国分类号：Ｓ５６５．１文献标识码：Ａ文章编号：１０００９８４１（２０１１）０１００２００４ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＢｉｏｌｉｓｔｉｃｓＴｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｏ

3、ｆＥｍｂｒｙｏｎｉｃＴｉｐｓｏｆＳｏｙｂｅａｎ［Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌ］ＭａｔｕｒｅＳｅｅｄｓ１１１１２１１ＹＥＭｅｉ，ＺＨＡＮＧＭｉｎ，ＹＡＮＧＳｕｘｉｎ，ＳＨＡＯＱｕｎ，ＡＮＨａｉｌｏｎｇ，ＣＡＯＺｉｙｉ，ＦＥＮＧＸｉａｎｚｈｏｎｇ（１．ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＰｌａｎｔＳｔｒｅｓｓＲｅｓｅａｒｃｈｏｆＳｈａｎｄｏｎｇＰｒｏｖｉｎｃｅ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅ，ＳｈａｎｄｏｎｇＮｏｒｍａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｊｉｎａｎ２５００１４；２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔ

4、ｏｒｙｏｆＣｒｏｐＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅＳｃｉｅｎｃｅｓ，ＳｈａｎｄｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉ’ａｎ２７１０１８，Ｓｈａｎｄｏｎｇ，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｅｓｔａｂｌｉｓｈａｎｅｆｆｉｃｉｅｎｔｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｔｉｐｓｏｆｓｏｙｂｅａｎｍａｔｕｒｅｓｅｅｄｓ，ｅｆｆｅｃｔｓｏｆ６ＢＡａｎｄｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄｄｕｒｉｎｇｂｉｏｌｉｓｔｉｃｓｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔ

5、ｉｏｎｏｆｓｏｙｂｅａｎ［Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ（Ｌ．）Ｍｅｒｒｉｌｌｃｖ‘Ｈｅｄｏｕ１２’］．ＴｈｅＵｉｄＡ（ＧＵＳ）ｇｅｎｅｗａｓｅｍｐｌｏｙｅｄａｓａｒｅｐｏｒｔｅｒｇｅｎｅｔｏｒｅｖｅａｌｔｈｅｆｏｒｅｉｇｎｇｅｎｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎａｎｄｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎ．－１Ｂｏｔｈｎｕｍｂｅｒａｎｄｅｌｏｎｇａｔｉｏｎｌｅｎｇｔｈｏｆｍｕｌｔｉｐｌｅｓｈｏｏｔｒｅａｃｈｅｄｔｈｅｈｉｇｈｅｓｔｖａｌｕｅｓａｔ５ｍｇ·Ｌ６ＢＡｆｏｒ１６ｈｉｎｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｍｂｒｙｏｎｉｃｔｉｐｓｏｆｍａｔｕｒｅｓｅｅｄｓ．Ｔｈｅ

6、ｏｐｔｉｍａｌｓｅｌｅｃｔｉｏｎｓｃｈｅｍｅｏｆｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓｗａｓａｇｒａｄｉｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆｈｙｇｒｏｍｙｃｉｎＢｆｒｏｍ－１－１５ｍｇ·Ｌｔｏ１５ｍｇ·Ｌ．ＴｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＧＵＳｇｅｎｅｗａｓｏｂｓｅｒｖｅｄｉｎｂｏｔｈｅｍｂｒｙｏｎｉｃｔｉｐｓａｆｔｅｒｐａｒｔｉｃｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔａｎｄｙｏｕｎｇｌｅａｖｅｓｏｆｐｒｏｇｅｎｙｔｒａｎｓｆｏｒｍａｎｔｓ．ＴｈｅｉｎｔｅｇｒａｔｉｏｎｏｆＧＵＳｇｅｎｅｉｎｔｏｔｈｅｓｏｙｂｅａｎｇｅｎｏｍｅｗａｓｄｅｍｏｎｓｔｒ

7、ａｔｅｄｂｙＰＣＲａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇａｎａｌｙｓｉｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｇｌｙｃｉｎｅｍａｘ；Ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｔｉｐｓｏｆｍａｔｕｒｅｓｅｅｄｓ；Ｂｉｏｌｉｓｔｉｃｓ；Ｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ大豆作为一种重要的粮油作物，除了传统的育局限，对于农杆菌不易感染的优良栽培品种实现综种技术，转基因技术在其遗传改良上也取得了许多合农艺性状的遗传转化改良。重要的成果，推动了世界范围内大豆产量的持续增“荷豆１２”属高产、高蛋白、抗病和抗倒伏的夏［１２］加。自从Ｈｉｎｃｈｅｅ和ＭｃＣａｂｅ等首次报道大豆转大

8、豆优良品种，为山东省的主栽夏大豆品种之一。化成功以来，很多研究者相继研发了不同的大豆遗现以“荷豆１２”成熟种子胚尖为材料，对基因枪转化传转化方法，但是受转化体系和受体系统的影响，体系中胚尖植株再生体系和筛选体系进行了优化大豆目前仍然是一种转化效率偏低的作物。目前研究，并以ＧＵＳ为报告基因，建立了一套简单