大豆胚尖遗传转化体系的优化及myb转录因子转基因大豆的鉴定

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1、大豆胚尖遗传转化体系的优化及MYB转录因子转基因大豆的鉴定OptimizationofSoybeanEmbryonicTipGeneticTransformationSystemandIdentificationofMYBTranscriptionFactorTransgenicSoybeans作者姓名：滕巍专业名称：作物遗传育种指导教师：王庆钰教授学位类别：农学硕士答辩日期：2015年06月03日本研究由转基因重大专项——优质功能型转基因大豆新品种培育（2014ZX08004-003）；国家自然

2、科学基金——大豆MYB转录因子基因对大豆异黄酮合成调控的研究(31371641）资助Projectsupportedby-NationalGMOscultivatenewvarietiessub-questio-nsoftechnologymajorprojects:Thequalityfunctionalnewvarietiesofgen-eticallymodifiedsoybeansnurtured“highisoflavonenewvarietiesofgenetic-allymodifi

3、edsoybeannurtured(2014ZX08004-003);TheNationalNaturalScienceFoundationofChinaThestudyofthemolecularregulationmechanismonsoybeanisoflavonesbyMYB(v-mybavianmyeloblastosisviraloncogenehomolog)transcriptionfactor(31371641).中文摘要大豆胚尖遗传转化体系的优化及MYB转录因子转基因大豆的鉴

4、定大豆（Glycinemax(L.)Merr）是我国重要的粮食作物，是多种生物活性物质的主要来源，如异黄酮等。大豆异黄酮属于一类次生代谢产物，有助于人类的健康。MYB（v-mybavianmyeloblastosisviraloncogenehomolog）类转录因子是功能最多的一类转录因子，参与调控大豆异黄酮合成途径，在植物的类黄酮代谢中发挥着重要作用。因此为提高大豆异黄酮含量需要建立一个高效的大豆遗传转化体系，同时利用转基因技术达到此目的。由于再生频率低，重复性差等问题普遍存在于大豆的遗传转化

5、中，如何提高转化效率一直是植物转基因技术中急需解决的难点之一。本文主要以大豆品种吉林35做为受体材料，从共培养阶段添加的激素浓度、激素活化方式、生根阶段的激素选择、激素浓度等方面优化农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系。结果显示，在转化体系中，重悬液和共培养培养基中添加100umol/L的乙酰丁香酮（AS），OD600为0.6-0.8的重悬菌液冰浴1h，生根阶段添加1.1mg/L的吲哚-3-乙酸（IAA），可使转化率提高到25.30%，并且于25d左右可获得可移栽的抗性植株，对比之前的体系转化率明显提

6、高，并在一定程度上缩短了培养周期，说明优化的遗传转化体系是可行的。对所得到的抗性植株分别用以下方法检测：PCR检测标记基因，bar试纸条检测蛋白，Glufosinate涂抹抗性植株，Westernblot检测蛋白。并统计5个不同品种的T0代植株转化率。获得T1代转基因植株，阳性率为17.82%。培育出22个阳性T1代转化株系，16个阳性T2代转化株系以及部分T3代植株。选用高效液相色谱法对转基因T3代植株进行大豆异黄酮含量的测定，分析MYB12B2、MYB12A两种转录因子对不同大豆品种籽粒和叶片

7、中异黄酮含量的影响。结果表明：MYB转录因子对大豆异黄酮含量有促升高作用，尤其MYB12B2调控更明显，改变量最高值为吉林35提高了2.89mg/g。关键词：大豆；胚尖；遗传转化；MYB转录因子；异黄酮IAbstractOptimizationofSoybeanEmbryonicTipGeneticTransformationSystemandIdentificationofMYBTranscriptionFactorTransgenicSoybeansAsanimportantcropinChi

8、na，Soybean(GlycineMax(l.)Merr)providesnotonlylargecookingoilandprotein,butalsoavarietyofbiologicalactivitysuchasisoflavone.Soybeanisoflavoneisakindofsecondarymetabolitesandplaysanimportantroleinhumanhealth.MYB（v-mybavianmyeloblastosisviralonco