用基因枪法将bt基因转入大豆的研究

《用基因枪法将bt基因转入大豆的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、第２６卷第２期大豆科学Ｖｏｌ．２６Ｎｏ．２２００７年４月ＳＯＹＢＥＡＮＳＣＩＥＮＣＥＡｐｒ．２００７用基因枪法将Ｂｔ基因转入大豆的研究１２２２王晓春，王罡，季静，王萍（１．河北北方学院农业科学系，宣化０７５１３１；２．天津大学农业与生物工程学院，天津３０００７２；３．淮海工学院海洋学院，连云港２２２００５）摘要以大豆品种合丰２５的体细胞胚为受体，以Ｂｔ基因为目的基因，应用基因枪法进行了遗传转化，经体细胞胚萌发、生根及壮苗培养和卡那霉素选择培养，获得了完整的抗性再生苗，经ＰＣＲ、ＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎ和点杂交分析鉴定，初步证明外源基因Ｂｔ已整合到大

2、豆的基因组中。关键词基因枪；Ｂｔ基因；大豆；体细胞胚；遗传转化中图分类号Ｓ５６５．１０３．５３文献标识码Ａ文章编号１０００－９８４１（２００７）０２－０１４０－０４ＰＵＴＢＴＧＥＮＥＴＲＡＮＳＦＯＲＭＡＴＩＯＮＩＮＴＯＳＭＡＴＩＣＶＩＡＭＩＣＲＯＰＲＯＪＥＣＴＩＬＥＢＯＭＢＡＲＤＭＥＮＴ１２２３ＷＡＮＧＸｉａｏｃｈｕｎ，ＷＡＮＧＧａｎｇ，ＪＩＪｉｎｇ，ＷＡＮＧＰｉｎｇ（１．ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅＳｃｉｅｎｃｅｓｏｆＨｅｂｅｉＮｏｒｔｈＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｕａｎｈｕａ０７５１３１；２．ＴｉａｎｊｉｎＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏ

3、ｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，Ｔｉａｎｊｉｎ３０００７２；３．ＨｕａｈａｉＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＭａｒｉｎｅＳｃｈｏｏｌ，Ｌｉａｎｙｕｎｇａｎｇ，２２２００５）ＡｂｓｔｒａｃｔＴｈｅＳｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｏｆｓｏｙｂｅａｎＨｅｆｅｎｇ２５ｗｅｒｅｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｂｙｍｉｃｒｏｐｒｏｊｅｃｔｉｌｅｂｏｍｂａｒｄｍｅｎｔ．Ｔｈｅｒｅｓｉｓｔａｎｔｐｌａｎｔｓｔｏｋａｎａｍｙｃｉｎｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄ，ｔｗｏｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｎｔｓｗｅｒｅｏｂｔａｉｎｅｄａｍｏｎｇｔ

4、ｈｅｍｂｙＰＣＲ，ａｎｄｔｈｅｐｏｓｉｔｉｖｅｐｌａｎｔｌｅｔｓｗｅｒｅｆｕｒｔｈｅｒａｎａｌｙｚｅｄｂｙｄｏｔｂｌｏｔｔｉｎｇａｎｄＰＣＲ－Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ＴｈｅｒｅｓｕｌｔｓｄｅｍｏｎｓｔｒａｔｅｄｔｈａｔｔｈｅｔａｒｇｅｔＢｔｇｅｎｅｈａｄｂｅｅｎｔｒａｎｓｆｏｒｍｅｄｉｎｔｏｔｈｅｓｏｙｂｅａｎｇｅｎｏｍｅ．ＫｅｙｗｏｒｄｓＳｏｙｂｅａｎ；Ｓｏｍａｔｉｃｅｍｂｒｙｏｓ；Ｂｔｇｅｎｅ；Ｇｅｎｅｔｉｃｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ长期以来，虫害一直是制约大豆高产、稳产、优１９８７年康奈尔大学的Ｓａｎｆｏｒｄ等人用基因枪转化洋质的

5、重要因素，尤其是食心虫每年给大豆生产造成葱表皮细胞获得成功后，这一技术很快被用来转化的损失在１０％～１５％。随着基因工程的发展，通过其他一系列对农杆菌不敏感的物种和基因型，１９８８［３］转基因技术将抗虫基因转入大豆，可能成为提高大年，ＭｃＣａｂｅ等用此法获得转基因大豆植株以来，豆产量和改善品质的有效途径之一。Ｂｔ毒蛋白基已经成为大豆转化的常规技术。大豆遗传转化所用因是苏云金芽孢杆菌（ＢａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎＧｉｎｅｓｉｓ，Ｂｔ）晶的材料多种多样，其中体细胞胚团是胚性细胞团，可体蛋白的简称，该晶体对鳞翅目、双翅目、鞘翅目的以长期继代增殖，具有两极

6、性等优点，是基因枪和农［４］昆虫都有毒杀作用，而对人、畜、哺乳动物和天敌无杆菌转化的理想的靶组织（Ｓａｔｏ，１９９３）。Ｓｔｅｗａｒｔ［１，２］［５］害，是目前使用最广泛的生物杀虫剂。自从等（１９９６年）用合成的Ｂｔ（ＣｒｙＩＡＣ）基因，通过基收稿日期：２００６－１１－１４基金项目：“国家植物转基因技术研究开发与中试基地建设”专项课题（Ｊ９９－Ｂ－００１）作者简介：王晓春（１９７２—），女，讲师，硕士，主要从事作物栽培与遗传育种工作。Ｔｅｌ：０３１３－２１１１７７８通讯作者：王罡教授，博士生导师。２期王晓春等：用基因枪法将Ｂｔ基因转入大豆的研究１４

7、１因枪轰击悬浮培养的球形体细胞胚，经过潮霉素筛公司，亚精胺购自Ｓｉｇｍａ公司，Ｔａｑ聚合酶和引物、选获得３个转基因株系；Ｐａｒｒｏｔｔ等（１９９２）用携带ＢｔＤＮＡ聚合酶、ＳＤＳ、ＤＮＡ回收试剂盒及植物基因组和ＣｐＴＩ基因微弹轰击各种基因型的大豆品种的胚ＤＮＡ提取试剂盒购自北京鼎国公司，ＨｉｎｄⅢ购自性悬浮系，得到三个转基因大豆细胞系，已经得到再ＴＡＫＡＲＡ宝生物工程（大连）有限公司，激素类和其＋生植株；Ｍａｕｇｈａｎ等（１９９９年）用基因枪法首次轰击他化学试剂均购自长春金鑫公司，Ｎ尼龙膜购自固体培养的大豆体细胞胚，将牛酪蛋白基因转入大Ａｍｅｒｓｈ

8、ａｍｐｈａｒｍａｃｉａ公司。豆，获得可育转基因植株。本研究以固体培养的大１．２方法豆体细胞胚为受体，以Ｂｔ基因为目的基因，