农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系中基因型的选择及抑菌条件的优化-论文.pdf

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1、第29卷第2期上海交通大学学报(农业科学版)Vo1．29No．22012年4月J0URNAL0FSHANGHAIJIAOTONGUNIVERslTY(AGRICULTURALSCIENCE)Apr．2012文章编号：1671—9964(2012)020024—04DOI：10．3969／J．ISSN．1671—9964．2012．02．005农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系中基因型的选择及抑菌条件的优化虞薇，杜鹃，贾光蕾，曹越平(Jk海交通大学农业与生物学院，上海200240)摘要：大豆基因型对农杆菌介导大豆胚尖遗传转化体系的转化效率有很大影响，同

2、时有效地抑制农杆菌是该体系的重要环节。研究选择3个东北地区主栽的大豆品种，以胚尖为外植体进行农杆菌介导的遗传转化，比较3个大豆品种的诱导率、伸长率和生根率，并在芽诱导、伸长及生根阶段采用不同的抗生素浓度配比，优化抑茵条件。实验结果表明3个品种中，黑农37为最佳受体品种；抗生素浓度对大豆胚尖遗传转化有很大影响。在芽诱导和伸长阶段添加头孢霉素300mg／L+羧苄青霉素150mg／L抑菌效果较好；而在生根过程中，不添加抗生素为最佳条件。关键词：大豆；胚尖；转化；基因型；抑菌中图分类号：$565．1文献标识码：AScreeningofGenotypeand

3、OptimizationoftheBacteriostaticConditioninAgrobacterium—MediatedSoybeanTransformationofEmbryonicTipsyWei，DUJuan，JIAGuang-lei，CAOYue-ping(SchoolofAgricultureandBiology，ShanghaiJiaotongUniversity，Shanghai200240，China)Abstract：Genotypeisoneofthefactorsaffectingtheefficientofsoybe

4、antransformation，andeffectivebacteriostasisiSveryimportantpointintheAgrobacterium-mediatedtransformation．Overuseofantibioticwillcausethesuppressionininduction，elongationandrooting．WeusedtheembryonictipsofHeinong37，Hefeng35andDongnong42asexplantsandobtainedtherateofinduction，el

5、ongationandrooting，whichweretreatedwithdifferentratioandconcentrationofcephalosporin(Cef)andcarbenicillin(Cb)combination．TheresultsindicatedthatHeinong37wasthebestreceptorand300mg／LofCef+150rag／LofCbhadbetterbacteriostaticeffectsinthestageofbudinductionandgrowth，butit’Soptimal

6、withoutantibioticinrootingperiod．Keywords：soybean；transformation；embryonictips；geneotype；bacteriostasis大豆的遗传转化方法主要采用农杆菌介导法。简便、周期短、重复性好的优点。目前用农杆菌介导常用的外植体有子叶节、下胚轴、胚尖。’。。等。以大豆的胚尖再生系统已获得转GUS基因、双价抗虫胚尖为外植体的大豆再生体系具有再生率高、操作基因的转基因大豆植株捌。收稿日期：2011—01—03基金项目：国家转基因重大专项2008ZX08004—001—12作者简

7、介：虞薇(1986一)，女，硕士生，研究方向：作物遗传育种，E-mail：zjywyweveryday@163．corn；曹越平(1967一)为通讯作者，女，教授，博士生导师，研究方向：作物遗传育种，E-mail：yuepingcao@sjtu．edu．cn第2期虞薇，等：农杆菌介导的大豆胚尖遗传转化体系中基因型的选择及抑菌条件的优化25基因型在很大程度上影响着转化效率。外植体8个伤口，得到胚尖外植体。将大豆胚尖外植体在经根癌农杆菌侵染后，Ti质粒上的T-DNA可将其工程菌液浸泡侵染30min后，25℃暗培养。共培所携带的外源目的基因有效地转移并整

8、合到受体细养5d后，用液体不定芽诱导培养基中洗去外植体胞的基因组中，从而获得转基因植株。经过农杆菌表面残存的农杆菌后，将清