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1、小麦幼胚基因枪转化的影响因素研究麦类作物学报2006,26(2):42~45JournalofTriticeaeCrops小麦幼胚基因枪转化的影响因素研究夏晓晖,陈耀锋,李春莲,吕瑞华,曹团武,曹欣,赵云祥(西北农林科技大学农学院,国家小麦改良中心杨陵分中心,陕西杨凌712100)搞要:为了明确不同因素对小麦基因枪法转化效率的影响.用PDS一1000/He型基因枪将抑韵】叶片衰老基因Psag12一ipt转入小麦幼胚细胞,通过对报告基因GUS瞬时表迭的检测,研究了金粉用量,质粒DNA用量厦轰击次数对转化率的影响.结果表明,金粉用量在100~400g范围内,时幼胚瞬时
2、表迭率影响不大,幼胚瞬时表迭率在73.7～85.0之间,但随金粉用量的增加,细胞瞬时表迭率明显提高;质粒DNA用量以每枪2.0g为最佳;轰击2抢幼胚和细胞瞬时表达率明显高于轰击1枪关键词:小麦幼胚;基因枪;GUS基因;瞬时表迭;转化效率中图分类号:S512.1;S336文献标识码:A文章编号:1009—1041(2006)02—0042—04EffectofFactorsonGUSTransientExpressionOfWheatImmatureEmbryoTransformatedbyParticleBombardmentXIAXiao—hui,CHENYao
3、—feng,LIChun—lian,LVRui—hua,CA0Tuan-Wll,CAOXin,ZHAOYun-xiang(CollegeofAgronomy,NorthwestA&FUniversity,YanglingBranchofNationalWheatImprovementCenter,Yangling,Shaanxi712100,China)Abstract:esag12一iptgenewastransformedintowheatimmatureembryocellsbyparticlebombardment.Theeffectsofgold
4、particleconcentrationandDNAamountperbombardmentontransformationefficiencyofwheatimmatureembryocellswerestudiedbyGUStransientexpression.Theresultshowedthatthegoldparticleconcentrationhadlittleaffectontransientexpressionofimmatureembryos,whileitplayedaremarkableroleinthecelltransientexp
5、ressionatarelativelyhighgoldparticleamountperbombardment.Itwasfoundthatthetransformationfrequencyofwheatimmatureembryocellswasthesuperiorwhencoatedby2.0/tgDNAandbombardedfor2timesperdish.Keywords:Immatureembryosofwheat(TriticumaestivumL);Particlebombardment;GUSgene;Transientexpression
6、;Transformationefficiency小麦是世界上重要的粮食作物之一,将现代生物技术尤其是植物转基因技术应用于小麦的遗传改良具有非常重要的意义.自美国学者Vasil等El,Z]利用基因枪将C,US和Bar基因导入小麦品种Pavon获得对除草剂Basta具有抗性的再生植株以来,基因枪介导的小麦遗传转化研究有了长足的发展迄今,人们已利用基因枪转化获得了小麦抗除草剂,优质,雄性不育等转基因系.基因枪介导的小麦遗传转化展现出良好的发展和应用前景.以往的研究在基因枪每枪最适金粉用量问题上,Altpeter等[引,Becher等[]认为每枪3og金粉有利于获得较高
7、的转化频率.安海龙等[5]研究了不同金粉用量对小麦幼胚瞬时表达及稳定转化频率的影响,结果却表明金粉用量以每枪500g为最佳.在基因枪每枪最适质粒DNA用量上,未见有资料表明存在公认的最佳用量,大多数学者采用每枪0.5～1.0big.还有些学者认为过多的DNA用量会使金粉结块,降低转化效率.针对以上问题,本文着重研究了不同的金粉用量和质粒DNA用量对小麦幼胚瞬时表达的影响,并就所获得的幼胚和愈伤组织在细胞学形态及发育方面进行了研究和探讨.收稿日期:2005—08—23修回日期:2005—10—15基金项目l国家转基因专项(jy03…B2302);陕西省科技攻关项目(
8、2003K
