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1、芹菜素对氧糖剥夺损伤小胶质细胞的抗炎作用论文.freelol/L)组,其中DMSO组和芹菜素组小胶质细胞进行OGD8h,之后加入相应药物培养基,观察24h后,收集细胞上清,用双抗夹心酶联免疫吸附法检测上清中IL-1β、TNF-α含量。结果24h后DMSO组细胞上清中IL-1β、TNF-α含量增多(P＜0.01)。芹菜素组TNF-α、IL-1β分泌量明显低于DMSO组。芹菜素可以抑制OGD后小胶质细胞的炎症反应,且呈剂量依赖性。结论芹菜素可以通过减少OGD/R小胶质细胞中IL-1β、TNF-α的产生而发挥
2、神经保护作用。【关键词】氧糖剥夺；芹菜素；小胶质细胞；白细胞介素-1β；肿瘤坏死因子-αAbstract：ObjectiveTostudytheneuroprotectiveeffectofapigeninonmicrogliaarymicroglialculturesneizedinto5groups：normalgroup,DMSOgroupandapigenin-treatedgroups(10,25,.freelol/L).ThecellsofDMSOgroupandapigenin-treat
3、edgroupicroglial.ConclusionApigeninmayplayaneuroprotectiveeffecticroglia.Keyicroglia；IL-1β；TNF-α小胶质细胞是中枢神经系统中数量第三的细胞,是重要的免疫感受与效应细胞,具有抗原提呈、分泌多种细胞因子、吞噬病原体和坏死组织以及神经修复的作用。近年来对脑缺血再灌注的研究逐渐升温,而小胶质细胞在此过程中扮演一种特殊的免疫活性细胞,发挥着双重作用。一方面,激活的小胶质细胞分泌白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子
4、-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)等炎症因子,加重脑损伤；另一方面,激活的小胶质细胞还可转化为吞噬细胞,清除死亡的神经元,同时分泌转化生长因子-β(TGF-β)、胰岛素样生长因子1(IGF1)、碱性成纤维生长因子(bFGF)、神经细胞粘附分子(NCAM)等神经营养因子,支持神经元的存活,重建缺血区内的稳态1。因此,脑缺血后适度的小胶质细胞反应可能有神经保护和抑制凋亡的作用,深入研究小胶质细胞在脑缺血过程中的作用,可为临床治疗脑缺血提供新的途径。本研究采用了体外氧糖剥夺(OGD)后复氧复糖
5、模型(OGD/R)来模拟小胶质细胞在体内缺血缺氧状态,与体内实验相比,可以更好地单独研究小胶质细胞在缺血缺氧中的变化2。芹菜素(apigenin)属黄酮类化合物,有“植物雌激素”之称,大量存在于水果、蔬菜、豆类、茶叶中,其中芹菜中含量最高。芹菜素的化学结构为4,5,7-三羟黄酮,其分子式为C15H10O6,相对分子质量为270,其4,5,7位置的3个羟基和C2C3双键决定了其独特的药理学效应和生物学特性。研究发现,芹菜素具有神经保护、抗氧化、自由基清除剂、抗肿瘤、抗炎、碳水化合物代谢促进因子、免疫调节剂
6、等作用3。本实验目的在于研究芹菜素单独作用于体外缺血缺氧小胶质细胞,对其细胞活化和细胞因子分泌的影响。1实验材料1.1动物新生SD大鼠(出生48h以内),温州医学院实验动物中心提供。1.2药物及试剂DMEM/F12高糖培养基,特优级胎牛血清(吉诺公司),盐酸利多卡因(10mL注射液,有效含量0.12g,分子量288.182),青霉素-链霉素(100×,上海碧云天生物技术有限公司),多聚赖氨酸(上海碧云天生物技术有限公司),0.25%Trypsin-EDTA(Gibco公司)。生物素标记GSA-IB4(B
7、S-1IsolectinB4BiotinConjugate,Sigma公司),HRP-链酶亲和素(北京中杉公司),DAB显色试剂盒(北京中杉公司)。芹菜素(陕西慧科植物开发有限公司),用100%二甲基亚砜(DMSD,Sigma公司)作为溶剂,配制成40mmol/L的浓缩液,滤器过滤除菌,-20℃备用。实验当日用完全培养基配制成芹菜素工作液,质量浓度分别为10、25、50μmol/L,DMSO终浓度在0.2%以下。1.3仪器ThermoForma310系列CO2培养箱,倒置显微镜及照相系统(Nikon公司
8、),ThermoHERAcell三气培养箱。2实验方法2.1混合胶质细胞培养采用McCarthy混合胶质细胞培养方法4,并加以改良。新生SD大鼠冰上麻醉10min,无菌环境下开颅取脑,冷DMEM/F12溶液清洗血污,并用小毛刷仔细剔除脑膜及血管。剔除小脑保留全部大脑,剪碎至1mm3的组织块,用预热至37℃的0.125%Trypsin-EDTA37℃消化5min,完全培养基终止消化后吸管吹打混匀,1000r/min离心5min,弃上清,加入含
