芹菜素对缺氧缺糖诱导pc12细胞神经损伤的保护作用研究

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1、分类号Ｒ２８学校代号１０５７２ＵＤＣ６１０密级学号２０１２１１０５３６２＊＇■．．ｆ逐户抑（中虔為夫聲＊ｖ、；＞ＧｕａｎｇｚｈｏｕＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＣｈｉｎｅｓｅＭｅｄｉｃｉｎｅ硕±学位论文■Ｉ芹菜素对缺氧缺糖诱导ＰＣ１２细胞■神经损伤的保护作用研究爷ｉ—＾、Ｉ．Ｉ学位申巧人巧慧唉户—指导教师姓名专业名称中巧学申请学位类型科学学位论文提交日期２０１５年５月广州中医药大学学位论文原创性声明：所呈交的学位论文本人郑重声明，是个人在导师的指导下，独立进斤

2、研巧工。外论文不含任何其他个人作所取得的成果除文中已经特别加１＾注明引用的内容，本或集体己经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中明确方式标明并致谢。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名日期：Ｗ王年Ｘ月ｉ日关于学位论文使用授权的声明本人完全了解广州中医药大学有关巧留使用学位论文的规定，同意学校保留或向。国家有关部口机构送交论文的复印件和电子版，允许被查阅和借阅本人授权广州中医药大学可将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可采用影印、缩印或其他复印手段保存和汇编本学位论文。（

3、保密论文在解密后应遵守此规定）！）币签名论文作者签名论文导或辦＞３ｄ日期：年Ｘ月日巧要目的：缺血性脑中风（ｓｔｒｏｋｅ）过程中因血管梗塞不能使血流到达，脑组织细胞失去能量和氧气供应一，恢复血液灌注后，不但没有使缺血区组织功能恢复，反而进步加重脑组织功能障碍和结构破坏，也促使加重神经细胞炎症级联反应，造成梗死灶的形成。＂＂随着脑中风现代中医毒损脑络假说与西方研究者提出的氧化应激自由基致病机制的不断深入联合，氧化应激形成的生物毒及毒性效应与中医内毒致病具有相似或相同的认识。通过抗氧化应激进行神经保护己经成为治疗脑缺血再灌注的主要方向，随着人们健

4、康养生意识的提高，开发高效、低毒的植物天然抗氧化剂成为了抗氧化剂发展一的个新动向。Ａ’芹菜素（ｐｉｇｅｎｉｎ主要在于伞形科植物旱巧（如ＩＭｗｏｖｅｏ／ｅｎｓＬ．Ｖ０Ｋ成ｚ／ｃｅＤＣ））Ｗ－；錢基黄丽叶，属于４苗７，具有Ｃ２、Ｃ３双键和Ｈ个装基团，展现了低氧化电势，，。，低离解热洽和较高的自由基清除能力，抗氧化性能强近年来芹菜素在中枢神经系统保护方面逐渐受到关注，提示着芹菜素在对预防／治疗机体脑血管疾病领域中存在巨大潜力。目前，国内外文献报道只见芹菜素能有效减轻脑缺血再灌注带来的损伤，然而芹菜素抗氧化潜能与其对脑缺血再灌注损伤保护之间的联系与机制尚未完全明

5、一确。，有待进步深入探讨采用缺糖缺氧再灌注（Ｏｘｙｇｅｎｇｌｕｃｏ化ｄｅｐｒｉｖａｔｉｏｎ／ｒｅｐｅｒｆｏｓｉｏｎ，ＯＧＤ／Ｒ）诱导的细胞神经损伤模型，模拟缺血性脑中风的生理过程，探讨芹菜素保护和预防脑缺血再灌一注带来的损伤及作用机制，为治疗脑中风提供条天然抗氧化物开发线索与研究基础。方法：１．芹菜素对ＯＧＤ／Ｒ诱导细胞损伤药效实验ＰＣ１２细胞为研究载体，用神经生长因子（ＮＧＦ）诱导分化而形成神经元样细胞，随后建立ＯＧＤ／Ｒ诱导细胞损伤模型，体外模巧脑缺血再灌注病理及生理改变；Ｗ芹菜素干预处理适当时间后，根据形态学观察，结合ＭＴＴ法、ＬＤＨ法等方

6、法探讨药物。的最佳作用浓度，评价其对损伤神经细胞的保护作用２．芹菜素影响ＯＧＤ／Ｒ损伤细胞的生化指标Ｈｏ－利用ｅｃｈｓｔ染色，ＡｎｎｅｘｉｎＶＦＩＴＣ／ＰＩ双染流式细胞仪技术，分析细胞调亡情况；ＤＣＦＨ－ＤＡ－使用巧光探针评价细胞内活性氧水平及氧化还原状态，利用ＪＣ１巧光探针测量线粒体膜电位进而初步探讨芹菜素对ＯＧＤ／Ｒ引起的神经细胞损伤的保护机制。Ｉ３．芹菜素保护ＯＧＤ／Ｒ诱导ＰＣ１２细胞神经损伤的抗氧化作用机理一Ｎｒｆ２信为进步考察药物作用机制，本实验检测分析与抗氧化相关的核转录因子号通路蛋白水平与ｍＲＮＡ表达，及其下游基因超氧化物歧化酶巧０

7、Ｄ）、过氧化氨酶－－ＣＡＴ、谷脯甘肤过氧化物酶（说ＨＰｘ、血红素单加氧酶ｌ（ＨＯｌ）、醜氧化还原酶１（））（ＮＱ０１）ｍＲＮＡ。表达，从而深入探讨其抗氧化作用的机理４．芹菜素保护ＯＧＤ化诱导ＰＣ１２细胞神经损伤的抗调亡作用机理检测分析与调亡相关的肿瘤抑制基因Ｐ５３信号通路蛋白水平与ｍＲＮＡ表达，及其ＣＸ－２调控下游基因Ｐ２１、ＰＵＭＡ、Ｂ、ＢＡＸ转录或翻译水平上的表达，从而深入探讨其抗调亡的机理。结呆：ＰＣ１２