atra对缺糖缺氧损伤pc12细胞的抗凋亡作用及机制探索

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1、重庆医科大学硕士学位论文ATRA对缺糖缺氧损伤PC12细胞的抗凋亡作用及机制探索姓名：喻琴申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：李廷玉201205重庆医科大掌斫士研究生学位论文AⅡ认对缺糖缺氧损伤PCI2细胞的抗凋亡作用及机制探索第一部分AT队对缺糖缺氧损伤PCI2细胞的抗凋亡作用初探摘要背景维生素A缺乏(VitamiIlAdeficiency，wo)、铁缺乏、碘缺乏已被啪和联合国儿童基金会确定为世界三大营养素缺乏性疾病。Ⅵ∞在世界范围内普遍存在，其中孕妇和儿童是其高危人群。新生儿缺氧缺血性脑损伤(hypo疵一ischemicbr抽d锄age，ⅧBD)是新生儿期常

2、见的中枢神经系统高发病、危重病，是导致新生儿死亡和残疾的主要原因之一。有研究表明，岫D的主要发病机制包括脑血流动力学变化、脑细胞能量代谢衰竭、再灌注损伤与氧自由基的产生、钙内流、兴奋性氨基酸导致神经毒性作用、迟发性神经元死亡和凋亡，其中细胞凋亡是HIBD神经细胞死亡的主要形式。本课题组的前期研究发现，mBD新生大鼠体内VA水平与其神经功能的修复存在密切的相关性，但其具体分子机制目前还不清楚。目的体外探讨全反式视黄酸(灯RA)对缺氧缺糖损伤(OGD)重庆医科大学硕士研究生学位论文后的PCI2细胞的修复作用。方法建立PCI2细胞OGD损伤模型，给予不同ATRA浓度(0．

3、5、2、4和20“mol／L)诱导，利用柚exillV-PI流式细胞术检测PCI2细胞的凋亡发生率，荧光探针JC一1测定细胞线粒体膜电位的变化，同时运用Real一t而ePCR技术和、№stemblot技术分析闷RA对OGD损伤后的PCI2细胞线粒体凋亡通路关键性凋亡因子表达水平的影响。结果光镜下观察显示PCI2细胞0GD损伤后，细胞聚团生长，胞体皱缩，折光性下降；AnnexillV-PI、JC．1检测显示细胞凋亡率明显增加，线粒体膜电位下降明显；加入2、4“m01／LATRA后均可降低细胞凋亡率，并保持线粒体膜电位的相对稳定，尤以4¨mol／LATRA作用效果明显；

4、与对照组相比较，0．5“mol／LATRA组没有显著差异；但20umo儿ATRA组的细胞凋亡率及线粒体膜电位下降率增高。Re扯tiIllePCR和W色stemblot检测显示，4umo儿ATRA组较OGD损伤组中的促凋亡因子Ba)(的表达水平显著下调，抗凋亡因子Bcl-2明显升高，蛋白表达水平与mRNA水平变化一致。结论4¨m01／LATRA对OGD损伤后的PCI2细胞具有抑制凋亡的作用，其机制可能是凰A通过上调Bcl-2和下调Bax的表达，影响线粒体凋亡通路，从而实现对缺糖缺氧损伤细胞的保护作用。关键词缺糖缺氧损伤；全反式视黄酸；细胞凋亡；线粒体膜电位STUDYO

5、FATRAROLESOFANTI．APOPTOSISONPCI2CELLSFOLLOWINGOXYGENANDGLUCOSE—DEPRI、—ATIONABSTRACTBackgroundⅥt锄in人iI．onandiodiIledeficienciesareidentmedastheworld’s廿1reemajornu仃itionaldeficiency洮easesbymeW}IOa11dU]ⅢCEF．Ⅵ蝴I谢delyeXistsalloverⅡ1eworld，aIldpre班antwomenaIldc11ildrenarethehi曲一riskpopmation

6、ofVf气D．Theneonatalllypoxicischelnicbraill嫡u叫(HⅢD)istheh曲ly丘equenta11dc血icalillnessdu血gt11eneonatalperiod，、)v11ichresuhsiIlneonatalcen仃alnervoussystemdiso耐ersaIldt11emailletiologyofi11】henceneonatalmortal时a11ddisability．Lotsofsmdieshavesho啪Ⅱ1atthemaillpanlogenesisofH口3D证VolVesinthechall

7、gesofcerebralhemodyIl锄ics，energyme讪olismfailureofbr抽cells，isch锄ia-r印erfusion蝎u叫a11dactiVationofni仃icoxideand舶eradicalproduCtion，in仃acellukcalci岫accuⅡlulation，neurotoxice髓ctsofeXcitatoryamjIloacids，delayedneuronaldeamaIld印optosis．Theapoptosisplaysthekeyr01eofthe砌BDpaⅡ10lo咖a1process．Ou