益肾胶囊对狼疮性肾炎大鼠的治疗作用

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　　益肾胶囊对狼疮性肾炎大鼠的治疗作用：吴喜利，张王刚，孙万森，乔成林，张晓强【摘要】目的探讨益肾胶囊对狼疮性肾炎(lupusnephritis,LN)大鼠的治疗作用及其作用机制。方法观察益肾胶囊组大鼠肾功能、24h尿蛋白(PRO/24h)的变化，分别采用双抗体夹心酶联免疫吸附法及放射免疫法检测血清Th1/Th2细胞因子(IL2、IL10、TGFβ1、IL6、TNFα)水平的变化和光镜观察肾脏病理形态学的改变。结果经过6周的治疗，益肾胶囊组及强的松组大鼠肾功能、24h尿蛋白及血清IL6、IL10、TGFβ1、TNFα水平与模型组比较均明显降低，IL2明显升高(P<0.05或P<0.01)，且益肾胶囊组大鼠肾功能、24h尿蛋白及血清IL6、TGFβ1、TNFα水平明显优于强的松组(P<0.05或P<0.01);益肾胶囊组及强的松组肾脏病理改变均有不同程度的改善，两组比较无明显差异。结论益肾胶囊可明显降低LN大鼠24h尿蛋白和改善肾功能，其作用机制可能与调节血清Th1/Th2细胞因子网络平衡及减轻肾脏病理损害有关。【关键词】益肾胶囊;狼疮性肾炎;肾功能;24h尿蛋白;Th1/Th2细胞因子　　ABSTRACT:ObjectiveToinvestigatethetherapeuticeffectofYishenCapsuleonlupusnephritis(LN)inratsanditsmechanism.MethodsiditronM型尿液自动分析仪进行检测。　　1.4.2肾功能的检测于第6周末大鼠处死前由股静脉采血，4℃3000r/min离心10min，取1mL血清做肾功能测定。　　1.4.3相关细胞因子的检测大鼠血清IL2、IL10、TGFβ1水平的变化采用双抗体夹心酶联免疫吸附法(ELISA)进行检测;血清IL6、TNFα采用放射免疫法测定。严格按照说明书操作，并由专门实验室工作人员进行检测。　　1.4.4肾脏病理形态学的观察于实验结束后将全部大鼠放血处死，取肾皮质用100mL/L甲醛固定，逐级酒精脱水、浸蜡、包埋，常规切片4μm，常规HE、PAS染色，光镜下观察其病理学改变。　　1.5统计学处理所有数据均以(±s)表示，采用SPSS13.0软件包进行统计分析，采用t检验。P<0.05为差异有统计学意义。　　2.2益肾胶囊对LN大鼠细胞因子水平的影响模型组、益肾胶囊组及强的松组大鼠细胞因子水平与对照组比较，均有显著性差异(P<0.05或P<0.01);益肾胶囊组及强的松组大鼠血清IL6、IL 10、TGFβ1、TNFα水平与模型组比较均明显降低，IL2明显升高(P<0.05或P<0.01)，且益肾胶囊组大鼠血清IL6、TGFβ1、TNFα水平明显优于强的松组(P<0.05或P<0.01，表2)。表2益肾胶囊对LN大鼠细胞因子水平的影响　　2.3肾脏的病理改变正常组：HE、PAS染色后光镜下见肾小球呈卵圆形。肾小球毛细血管壁内皮细胞、毛细血管基底膜、足细胞、系膜细胞、系膜基质、肾小球囊壁上皮细胞、囊壁基底膜、肾小球囊腔清晰;肾小管上皮细胞、基底膜、肾小管腔清晰;模型组：肾小球增大并可见明显的毛细血管基底膜弥漫性增厚，毛细血管基底膜增厚呈双轨状，致毛细血管壁增厚，血管腔狭窄，部分毛细血管小叶边缘呈小结节状(毛细血管球呈分叶状);系膜细胞也可见增生，未见毛细血管内皮细胞及足细胞增生，也未见毛细血管壁坏死、血管腔内玻璃样血栓及炎细胞浸润，未见毛细血管壁塌陷，肾小囊内未见渗出物及新月体形成。肾小管：近端小管可见小管上皮变性、坏死，小管基底膜完好，近端小管及集合管内可见蛋白，细胞管型;益肾胶囊组及强的松组：以上各病变皆有不同程度的改善，两组比较无明显差异(图1，图2)。　　3讨论　　系统性红斑狼疮是一种异常免疫调节和自身抗体过量产生引起的以T、B细胞异常活化和病理性自身抗体过量产生为特征的自身免疫性疾病。有研究发现LN患者及动物模型体内存在着明显的细胞因子网络失衡，并证实Th1/Th2型细胞因子网络失衡在LN的诱导发生和发展中起关键作用[78]。由于对不同的研究对象，所报道的细胞因子分泌异常的表现不尽一致。Th1细胞主要分泌IL2、IFNγ、TNFα等细胞因子，而Th2细胞主要产生IL4、IL6、IL10和TGFβ等细胞因子[9]。大量研究证实，Th1和Th2型细胞因子为一对重要的调节因子，同时又互为抑制因子[10]。它们通过相互诱生、相互调控、受体表达以及生物学效应的相互影响(增强与拮抗)，组成了免疫微环境中的特殊的细胞因子网络(cytokinesRNA肾脏局部表达量的增加可能会引起肾脏功能和结构多方面的改变，在LN向肾小球硬化的发展过程中起一定作用[15]。TGFβ1是目前公认的肾脏致纤维化因子，许多进展性肾病包括LN均以TGFβ1持续、过度表达为特征[16]。它可直接或间接地促使Ⅰ型、Ⅳ型胶原等细胞外基质的合成与积聚，诱导炎症细胞的浸润、成纤维细胞的积聚和血管的生成，可抑制MRL/lpr狼疮小鼠宿主抗革兰阳性和阴性细菌感染的能力;可下调IL2介导的T细胞增生信号传导而抑制其增生等。 　　因此，调节Th1/Th2细胞因子网络失衡将为LN的治疗提供一种有效的治疗方法。本研究结果显示，益肾胶囊组及强的松组大鼠肾功能及24h尿蛋白与模型组比较均明显改善(P<0.05或P<0.01)，且益肾胶囊组明显优于强的松组(P<0.05)。说明益肾胶囊对狼疮性肾炎具有明显的治疗作用;益肾胶囊组及强的松组大鼠血清IL6、IL10、TGFβ1、TNFα水平与模型组比较均明显降低，IL2明显升高(P<0.05或P<0.01)，且益肾胶囊组大鼠血清IL6、TGFβ1、TNFα水平明显优于强的松组(P<0.05或P<0.01)。提示益肾胶囊治疗狼疮性肾炎的作用机制与该药具有调节细胞因子网络失衡有密切的关系。【参考文献】　　[1]吴喜利，孙万森，乔成林，等.益肾胶囊对慢性肾小球肾炎患者尿蛋白及免疫功能的影响[J].广州中医药大学学报,2004,21(2):100103.　　[2]吴喜利，乔成林，孙万森，等.益肾胶囊对慢性肾小球肾炎患者尿蛋白及NK细胞的影响[J].第四军医大学学报,2003,24(17):15191519.　　[3]吴喜利，孙万森，张王刚，等.益肾胶囊对系膜细胞增殖性肾小球肾炎大鼠肾脏NFκB及PDGFβ表达的影响[J].西安交通大学学报(医学版),2007,28(3):293296.　　[4]ed,2007,13(3):215218.　　[5]吴喜利，孙万森，张王刚，等.益肾胶囊对慢性肾小球肾炎患者血清血管内皮生长因子及细胞免疫的影响[J].中国中药杂志,2007,32(21):103105.　　[6]李荣山.现代肾脏病实验技术[M].北京：军事医学科学出版社,2006:116118.　　[7]梁科，刘华锋，廖丽琼，等.狼疮肾炎患者Th1/Th2细胞因子失平衡状况的研究[J].中华风湿病学杂志,2004,8(11):671675.　　[8]李非，白雪源，陈香美，等.利用基因芯片探讨中药复方对MRL/IPr狼疮小鼠肾基因表达及Thl/Th2细胞的调节作用[J].中国中西医结合杂志,2003,23(3):198201.　　[9]何广胜，周玲，吴德沛.Th1和Th2细胞的分化调节机制[J]. 中华血液学杂志,2005,26(2):125128.　　[10]王宏天，樊均明.细胞因子在系统性红斑狼疮和狼疮性肾炎中的作用[J].国外医学·泌尿系统分册,2005,25(4):529532.　　[11]蔡美英.医学免疫学[M].北京：科学技术出版社,2002:5053.　　[12]张道杰，段朝霞.IL10研究进展[J].国外医学·免疫学分册,2003,26(1):3941.　　[13]ISHIDAH,MUCHAMUDT,SAKAGUCHIS,etal.ContinuousadministrationofantiinterleukinantibodiesdelaysonsetofautoimmunityinNZB/ed,1994,179(1):305310.　　[14]KOLLIASG,KONTOYIANNISD.RoleofTNF/TNFRinautoimmunity:specificTNFreceptorblockademaybeadvantageoustoantiTNFtreatments[J].CytokineGroofprogressionofrenaldamageinlupusnephritisPathogenesisofrenalscarring[J].Lupus,1998,7(9):604610.