肾络康冲剂对iga肾病模型大鼠的治疗作用

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万方数据1922塞旦匿堂苤查垫!Q堡箜堑鲞箜!!塑肾络康冲剂对IgA肾病模型大鼠的治疗作用孟昱林夏滨祥摘要目的：探讨肾络康冲剂对实验性IgA肾病大鼠的治疗作用。方法：运用牛血清白蛋白+四氯化碳+脂多糖方法建立Iga肾病大鼠模型。随机分为模型组、肾络康冲剂组、贝那普利组，并同时设立空白组。实验共14周，药物干预后常规检测尿红细胞计数、尿蛋白定量、尿N一乙酰一13．D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、血肌酐、血尿素氮．用免疫荧光、免疫组化的方法分别检测肾组织病理和转化生长因子B。(TGF．p。)的表达水平。结果：肾络康冲剂组可显著减少尿红细胞计数、尿NAG、血肌酐、血尿素氮(P<0．05)，显著降低TGF—B。在肾脏肾小管间质的表达。肾络康冲剂组与贝那普利组均可显著降低24h尿蛋白(P<0．01)。但两组间比较差异无显著性(P>0．05)。结论：肾络康冲剂可明显减少IsA肾病大鼠免疫复合物的沉积，减轻系膜增生，下调TGF．B，的表达，改善肾功能，延缓肾纤维化和肾衰。关键词肾小球肾炎，IGA；肾络康冲剂；尿N一乙酰一B．D氨基葡萄糖苷酶；转化生长因子p。TherapeuticaleffectofShenluokangChongjionratswithIgAnephropathyMENGYu—lin’．XIABin—xiang．术TheAffiliatedHospitalofNorthChinaCoalMedwdCollege。Tangshan063000，China【Abstract】ObjectiveTostudythetherapeuticaleffectofShenluokangChongjionratswithexperimentalIgAnephropathy(IgAN)．MethodsTheIgANratmodelswhichwereconstructedthroughoraladministrationofbovineserumalbumin，subcutaneousinjectionofcarbontetrachloride，andintravenousinjectionoflipopolysaccharide，weredividedintomodelgroup，ShenluokangChon舀igroup，benazeprilgroup，andnormalcontrolgroup．Ratsweresacrificedatweek14todetecturineerythrocyte，24hoursurineproteinexcretion(UPE)，urineD-N-Acetylglucosaminidase(NAG)，serumcreatinine(Scr)，andbloodurinenitrogen(BUN)．Thepathologicalchangesofrenaltissueswereobservedbylightmicroscopyandimmunofluorescentexamination．ImmunohistochemistryWaSusedtoinvestigatetheexpressionoftransforminggrowthfactor岱1(TGF-131)．ResultComparedwithmodelcontrolandbenazeprilgroups，ShenluokangChon舀igroupcanmarkedlyreducethecontentofurineerythrocyte，NAG，Scr，andBUNweresignificantlydecreaSed，andtheexpressionofTGF·p1WaSdecreasedevidentlyinthetubuleinterstitiuminShenluokangChon自igroupfPo．05)．ConclusionShenluokangChon舀icallreducethedepositionofIgAinglomerulusandtheexpressionofTGF一13linrenaltissure，inhibitmoreprofoundmesangialproliferationandmesangialexpansion，amelioraterenalfunction，postponedtheprogressionofrenalinterstitialfibrosisandrenalfailure．【Keywords】Glomerulonephritis，IGA；ShenluokangChongji；UrineD-N-Acetylglucosaminidase；TransforminggrowthfactorBlIgA肾病(IgAN)首先由Berger在1968年报道．又称Berger’s病。其特征是反复发作的肉眼和(或)持续的镜下血尿，诊断的确立，必须依赖系膜有明显的IgA沉积。IgAN为临床常见的一种慢性肾小球肾炎，约占原发性肾小球肾炎的30％t13；并认为该病并非良性病变，在出现首发症状后，每年有1．5％的IgAN患者进展为终末期肾脏疾病doi：10．3969／j．issn．1006-5725．2010．11．022作者单位：063000河北省唐山市，华北煤炭医学院附属医院(孟昱林)；150063哈尔滨市，黑龙江省中医研究院(夏滨祥)(ESRD)‘21。大约20％～30％的患者20年后进展为ESRD[”。即使轻微病变20年后也导致肾功能下降⋯。研究表明转化生长因子13，(TGF．p。)与IgAN的进展密切相关㈣。本实验通过建立IgAN大鼠模型，运用肾络康冲剂进行治疗，观察各项指标。探讨其可能的作用机制。1材料与方法1．1实验动物普通级Wistar大鼠32只．雄性．体重(150±15)g。由吉林长春高新医学动物实验研究中心提供，许可证号：SCXK一(吉)2003．0004。实验在黑龙江省中医研究院动物实验中心(国家二级实验室)进行。 万方数据塞围匡堂盘查2Q!Q生箜堑鲞筮!!塑1．2实验药物牛血清白蛋白(BSA)．Roche提供。脂多糖(LPS)，Sigma提供。四氯化碳(ccl。，化学纯)、蓖麻油(分析纯)，天津化学试剂一厂提供。贝那普利，上海新亚药业闵行有限公司提供。肾络康冲剂(黄芪、太子参、熟地黄、山茱萸、防风、苍术、鱼腥草、益母草、JI|牛膝、丹参等)，江阴天江药业有限公司提供免煎(配方)颗粒，配制成混悬液，每毫升含生药3g。1．3实验试剂尿蛋白定量、尿N一乙酰一B—D氨基葡萄糖苷酶(NAG)、肌酐、尿素氮试剂盒。南京建成生物工程研究所提供。异硫氰酸荧光素(FITC)标记兔抗大鼠IgA抗体、TGF．p。，北京博奥森生物技术有限公司提供。1．4实验仪器SysmexOF．100全自动尿液分析仪；HITACH7060全自动生化分析仪；721分光光度计(上海第三分析仪器厂)。1．5实验方法1．5．1模型复制参考文献『6—7]运用LPS+BSA+CCI。方法建立实验性IgAN模型，具体实施方案如下：BSA(400mg／kg，隔日灌胃)×6周+LPS(每次每只0．05mg，第6、8周尾静脉注射各1次)+(蓖麻油每次每只0．5mL+CCI。每次每只0．1mL)，每周皮下注射1次共9周。1．5．2分组与用药Wistar大鼠适应性喂养1周。经尿蛋白、尿潜血试纸测试阴性，随机分为空白组、模型组、肾络康冲剂组、贝那普利组。第1l周开始空白组、模型组分别予日常饮用水灌胃．贝那普利组予贝那普利[按体表面积计算0．9mg／(kg·d)]。肾络康冲剂组予肾络康冲剂f按体表面积计算24．3g／(kg·d)]，均予等体积容量，每日1次灌胃。治疗时间共4周。1．5．3标本采集、检测指标及方法于实验第lO、14周末，用代谢笼收集24h尿；第14周末将各组大鼠禁食不禁水12h。用10％水合氯醛(300mg／kg)腹腔注射麻醉，经腹主动脉采血，摘取肾脏。沿冠状将肾脏分成两半，再沿冠状面将肾脏继续切分。取外围的肾皮质一部分做石蜡切片．用4％的甲醛固定．行石蜡包埋切片．进行光镜检查、免疫组化检测：一部分做冰冻切片，进行免疫荧光检测。尿常规、尿沉渣红细胞计数：SysmexOF．100全自动尿液分析仪。24h尿蛋白定量：考马斯亮蓝法，721分光光度计。血清肌酐：苦味酸法(除蛋白)，HITACH7060全自动生化分析仪。尿素氮：二乙酰一肟法。HITACH7060全自动生化分析仪。NAG酶：比’色法，721分光光度计。1．5．4光镜分别作HE、PAS染色。观察组织形1923态学结构。1．5．5免疫荧光取新鲜组织常规切片。厚度6¨m，室温风干，丙酮固定10min，0．01％PBS缓冲液洗3次，每次5rain。滴加异硫氰酸荧光素标记兔抗大鼠IgA抗体，37℃避光孵育45min。用PBS液洗3次，甘油缓冲液封片，镜检采用Olympus荧光显微镜。半定量标准参照目前国内外通用的5级法(±一++++)分级：低倍镜下不能显示，高倍镜下似乎可见为±；低倍镜下似乎可见，高倍镜下可见为(+)；低倍镜下可见，高倍镜下清晰可见为(++)；低倍镜下清晰可见，高倍镜下耀眼为(+++)；高倍镜下刺眼为(++++)。1．5．6免疫组化按照sP法免疫组化试剂盒说明书逐步操作，将石蜡切片常规脱蜡，水化后，用PBS冲洗3次，每次5min：每张切片加一滴过氧化酶阻断剂(试剂A)，室温下孵育10min；再用PBS洗3次后，滴加非免疫性动物血清(试剂B)，37℃孵育5min；弃去非免疫性动物血清；滴加一抗，4℃过夜；PBS洗3次后再滴加二抗(试剂c)，37℃孵育10min：PBS洗3次后滴加链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶溶液(试剂D)，37℃孵育10rain；PBS洗3次后．用新鲜配制的DAB显色液显色，显微镜下观察2。5min；自来水冲洗，苏木素浅染，自来水冲洗返蓝，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。1．6统计学方法全部数据采用SPSS11．30统计软件进行处理，计量资料用孑±s表示．组间差异采用单因素方差分析，组间两两比较采用SNK．q检验法。等级资料采用非参数秩和检验。P<0．05为差异有统计学意义。2结果、2．1一般状态观察模型组、肾络康冲剂组和贝那普利组大鼠造模过程中注射CCl,、LPS后均有不同程度的摄食减少、披毛蓬松、生长迟缓、身体消瘦、蜷缩。随时间推移逐渐趋于稳定。2．2尿红细胞计数、24h尿蛋白定量。尿NAG检测表1结果提示肾络康冲剂和贝那普利均能显著降低尿蛋白定量、尿NAG．与模型组比差异较有显著性(P<0．01)；肾络康冲剂能显著减少尿红细胞计数、降低尿NAG．与贝那普利比较差异有显著性(P<0．05)，在降低尿蛋白定量、尿NAG方面与模型组比较差异有显著性(尸<0．01)；在降低尿蛋白定量方面肾络康冲剂略逊于贝那普利，但差异无统计学意义(尸>0．05)。2。3血肌酐、血尿素氮检测表2结果提示肾络康冲剂能显著降低血肌酐、血尿素氮，与模型组比较差异有显著性(P<0．05)；肾络康冲剂能显著降 万方数据1924表1各组尿红细胞计数、24h尿蛋白定量、尿NAG比较牙±s注：与空白组比较，·P10I止g／min时，两种受体都兴奋。SVR升高；10—20p,g／min主要激动0t。受体。强烈收缩周围血管掩盖B受体效应[“。对法洛四联症患者也可使用小剂量新福林．它能明显改善麻醉诱导后的低血压，且对SpO：有一定改善作用[引。我们使用肾上腺素20嵋／次，提高了患者血压，改善了SpO：，但是患者的心率变化较小，同样也增加SVR．迫使血液通过狭窄的右室流出道．增加血液氧合。参考文献[1]于晋，黄保堂，孙广龙．重症法洛四联症行中心分流术7例体会[J]．实用医学杂志，2008，24(21)：3731—3732．[2]夏园生，刘威，杨盛春，等．儿童法洛四联症并主动脉瓣反流手术根治1例[J]．实用医学杂志，2008，24(9)：1555．[3]于钦军，李立环．临床心血管麻醉实践[M]．北京：人民卫生出版社，2006：336．[4]大金，杭燕南．实用I临床麻醉学[M]．北京：中国医药科技出版社，2001：119．[5]曾宇，曹殿青，姚华国．小剂量新福林在法洛氏四联症手术麻醉中的应用[J]．广东医学院学报，2001，19(2)：122．(收稿：2009—12—08编辑：袁宁)