三叶人字草对iga肾病模型大鼠的影响

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三叶人字草对IgA肾病模型大鼠的影响作者：王霞,周玖瑶,孙毅东,余应嘉【摘要】　　【目的】观察三叶人字草对IgA肾病模型大鼠的影响。【方法】选用KM小鼠随机分为空白对照组,云南白药胶囊对照组(剂量为0411g·kg-1·d-1),人字草高、中、低剂量组(剂量分别为24660、12330、6165g·kg-1·d-1),持续给药7d后,采用激光多普勒血流仪记录小鼠耳廓微循环的血流速度,观察微循环的改善情况。选用SD大鼠随机分为空白对照组,云南白药胶囊对照组(剂量为0206g·kg-1·d-1),人字草高、中、低剂量组(剂量分别为12340、6170、3085g·kg-1·d-1),连续给药7d后取血,采用血液流变学测变仪检测血液流变学指标。选用SD大鼠随机分为空白对照组,模型组,雷公藤多苷组(剂量为00165g·kg-1·d-1),人字草高、中、低剂量组(剂量分别为160、80、40g·kg-1·d-1),除空白对照组外,其他组均采用牛血清白蛋白＋脂多糖＋CCl4联合运用8周复制实验性IgA肾病模型,于第8周开始给药至第12周末,各组大鼠均于腹主动脉取血检测尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)和血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量。【结果】人字草高、中、低剂量组均可显著增强小鼠耳廓微动脉的血流速度(P＜005或P＜001),且呈一定的剂量效应关系。人字草高剂量组可显著降低高切、中切、低切全血黏度(P＜011 01),改善大鼠血液流变学指标。除人字草低剂量组对血清MDA含量无显著影响外,其他各给药组均可显著降低模型大鼠BUN、SCr、MDA含量,升高SOD活力(P＜005或P＜001)。【结论】三叶人字草治疗IgA肾病的效应可能与其能改善微循环和血液流变学指标,清除自由基,提高抗氧化酶活力有关。【关键词】三叶人字草/药理学IgA肾病/中药疗法血液流变学超氧化物歧化酶/血液丙二醛/血液疾病模型,动物大鼠小鼠　　Abstract:ObjectiveTostudythetherapeuticmechanismofKummerowiastriata(Thunb.)Schindl.(KSC)forIgAnephritisrats.Methods(1)Kunmingratswererandomizedintoblankcontrolgroup,YunnanBaiyaoCapsules(YBC)group(inadoseof0411g·kg-1·d-1),andhigh,middleandlowdoseKSCgroups(inadoseof24660,12330and6165g·kg-1·d-1respectively).Themedicationlasted7continuousdays.Aftertreatment,weusedlaserDopplerflowmeterytodetectbloodflowrateofmicrocirculationinratsauricleandmonitorthechangesofauricularmicrocirculation.(2)SDratswererandomizedintoblankcontrolgroup,YBCgroup(inadoseof0206g·kg-1·d-1),andhigh,middleandlowdoseKSCgroups(inadoseof12340,6170and3085g·kg-1·d-1respectively).Hemorheologicalindexeswereexaminedafter7daytreatment.(3)SDratswererandomizedintoblankcontrolgroup,modelgroup,11 TripterygiumGlycosidesTabletsgroup(inadoseof00165g·kg-1·d-1),andhigh,middleandlowdoseKSCgroups(inadoseof160,80and40g·kg-1·d-1respectively).Exceptthattheblankcontrolgroup,theratsinothergroupsweregivenbovineserumalbumin(BSA),lipopolysaccharide(LPS)andcarbontetrachloridetoinduceIgAnephritis.Medicationstartedfromthe8thweekandendedintheendofthe12thweek.Aftertreatment,arterialbloodsamplingwascarriedouttodetectthelevelsofbloodureanitrogen(BUN),serumcreatinine(SCr),thewholebloodsuperoxidedismutase(SOD)rateofratauricularmicrocirculation(P<005orP<001)inadoseeffectmanner.HighdoseKSCdecreasedhigh,middleandlowshearwholebloodviscosity(P<001),improvedthehemorheologicalindexes.ExceptthatlowdoseKSChadnoeffectonMDAcontent,SODactivitywasincreased,andBUN,SCrandMDAweredecreased,inothermedicationgroups(P<005orP<001).ConclusionThetherapeuticmechanismofKSCforIgAnephritisisprobablyrelatedwiththeimprovementofmicrocirculationandhemorheology,withtheclearanceoffreeradicals,andwiththeincreaseofantioxidaseactivity．　　Keywords:KUMMEROWIASTRIATA(THUNB.)11 SCHINDL./pharmacology;IGANEPHROPATHY/TCDtherapy;BLOODRHEOLOGY;SUPEROXIDEDISMUTASE/blood;MALONDIALDEHYDE/blood;DISEASEMODELS,ANIMAL;RATS;MICE　　IgA肾病(IgAnephropathy,IgAN)是肾小球系膜区存在以IgA为主的颗粒样沉积、伴或不伴有其他免疫复合物沉积,临床上以血尿或血尿伴蛋白尿为主要表现的肾小球肾炎［1］。三叶人字草为豆科植物三叶人字草［Kummerowiastriata(Thunb.)Schind1.］的全草入药。药性甘、淡,微寒,功能清热解毒、活血、利尿、止泻。前期研究［2-3］表明,三叶人字草有显著的止血作用，对急性炎症和炎症后期的结缔组织增生有良好的抑制作用。在治疗血尿、肾炎蛋白尿方面有确切的疗效［4］。本研究通过观察三叶人字草对小鼠耳廓血液微循环、大鼠血液流变学以及IgA肾病模型大鼠的影响,探讨三叶人字草治疗IgA肾病的作用机理,现报道如下。　　1　材料与方法　　1.1　药物三叶人字草购自广州清平药材市场,由广州中医药大学博物馆中药标本中心张秋镇老师鉴定为豆科属植物三叶人字草［Kummerowiastriata(Thunb.)Schind1.］的全草干品,经加水煎煮、过滤,浓缩至80011 g/L药液,置冰箱备用，雷公藤多苷片由浙江普洛康裕天然药物有限公司提供,批号：070901，云南白药胶囊由云南白药集团股份有限公司提供，批号：20080202。　　1.2　主要试剂与仪器尿素氮（BUN）、肌酐（SCr)、超氧化物歧化酶(SOD)及丙二醛(MDA)试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供,批号：20080613；牛血清白蛋白(BSA)由Mbchem公司提供,广州威佳科技有限公司分装,批号：20070826；脂多糖(LPS)由北京鼎国生物技术有限公司提供,批号：024K4067；蓖麻油由天津市耀华化学试剂有限责任公司提供,批号：20060505；四氯化碳(CCl4)由天津市大茂化学试剂厂提供,批号：20080205；水合氯醛由天津市科密欧化学试剂有限公司提供,批号：20080118；722紫外可见分光光度计(上海第三分析仪器厂)；BS210S电子分析天平(北京赛多利斯天平有限公司)；20R低温高速离心机(德国Hermle公司)；PF5001激光多普勒血流仪(瑞典百灵威医疗仪器有限公司)；MS/XWF血流变、微循环、红细胞变形三用仪(成都麦赛科贸公司)。　　1.3　动物SPF级SD大鼠110只,体质量180～220g,雌雄兼用,由广州中医药大学实验动物中心提供,合格证号：SCXK(粤)200301；KM小鼠60只,雌雄兼用,体质量18～22g,购自广州中医药大学实验动物中心,合格证号：SCXK(粤)20080020,粤监证字2008A003。11 　　1.4　各组对小鼠耳廓微循环的影响取KM小鼠60只,雌雄各半,随机分为5组(每组12只)，即空白对照组(灌胃等容积蒸馏水),云南白药胶囊对照组(剂量为0411g·kg-1·d-1),人字草高、中、低剂量组(剂量分别为24660、12330、6165g·kg-1·d-1),持续给药7d,每天1次。于第7天末次给药后60min,用50mg/L水合氯醛麻醉,左耳用胶布贴拔鼠毛并固定,采用激光多普勒血流仪记录小鼠耳廓微循环的血流速度,以判断微循环的改变情况。　　1.5　各组大鼠血液流变学试验取SD大鼠50只,随机分为5组(每组10只)，即空白对照组(灌胃给予等容积蒸馏水),云南白药胶囊对照组(剂量为0206g·kg-1·d-1),人字草高、中、低剂量组(剂量分别为12340、6170、3085g·kg-1·d-1),持续给药7d,每天1次。于第7天末次给药后15h,眼眶后静脉丛取血3mL,置于肝素抗凝管,采用血液流变学测变仪检测血液流变学指标。　　1.6　IgA肾病大鼠模型的复制［5］及分组与给药除空白对照组外,各组均采用BSA+LPS+CCl4复制实验性IgA肾病模型：口服免疫原BSA(剂量为400mg·kg-1·d-1,以pH25～30的酸化水配制),隔天灌胃,持续6周；皮下注射蓖麻油05mL+CCl4010mL,每周1次,持续9周,并联合运用LPS(分别于第6、8周以005mgLPS尾静脉注射)。取SD大鼠60只,适应性喂养3d后,随机分为空白对照组,模型组,雷公藤多苷组，三叶人字草高、中、低剂量组,每组10只。空白对照组隔日口服酸化水(pH25～311 0),持续6周,于第8周起蒸馏水灌胃至实验结束；模型组于第8周起蒸馏水灌胃至实验结束；雷公藤多苷组于第8周起灌胃雷公藤多苷00165g·kg-1·d-1至第12周末；三叶人字草高、中、低剂量组分别于第8周起灌胃人字草煎煮液160、80、40g·kg-1·d-1,至12周末。试验进行至12周时,各组大鼠禁食不禁水12h后,腹主动脉取血待测。　　1.7　检测指标观察大鼠的精神状态、体质量、体毛、饮食状况以及活动情况等,每周测体质量1次。取血测定生化指标BUN、SCr和血清SOD活力、MDA含量。　　1.8　统计学方法采用SPSS110软件进行统计学处理。　　2　结果　　2.1　各组对小鼠耳廓微循环的影响表1结果表明：三叶人字草高、中、低剂量组和云南白药胶囊组均可显著增强小鼠耳廓微动脉血流速度,与空白对照组比较差异有显著性意义P<005或P<001),且呈剂量依赖关系,说明三叶人字草具有增强小鼠耳廓微循环的作用。表1各组对小鼠耳廓微循环的影响(略)　　2.2　各组对大鼠血液流变学的影响表2结果表明,血液流变学检测显示三叶人字草高剂量组的高切、中切、低切全血黏度显著低于于空白对照组(P<001)。说明三叶人字草提取液具有一定改善大鼠血液流变学的作用。表2各组对大鼠血液流变学的影响(略)11 　　2.3　各组对IgA肾病模型大鼠的影响　　2.3.1　一般情况造模后各组大鼠均有不同程度的精神欠佳、体毛干枯、摄食减少等情况。特别是每周皮下注射蓖麻油+CCl4之后以及第6周和第8周尾静脉注射LPS后情况显著,经2～3d后基本恢复正常。各组动物在试验开始1～6周体质量增加较快,第6周和第8周尾静脉注射LPS后,体质量增加缓慢,自第8周给药后情况好转。　　2.3.2　各组对IgA肾病模型大鼠肾功能的影响表3结果显示,模型组的BUN和SCr含量显著高于空白对照组（P<001）,各治疗组的BUN和Scr含量显著低于模型组(P<005或P<001)。表明各治疗组对模型大鼠肾功能有明显改善作用,其中雷公藤多苷组和人字草高剂量组疗效最好。表3各组对IgA肾病模型大鼠肾功能的影响（略）　　2.3.2　各组对IgA肾病模型大鼠血清SOD活力、MDA含量的影响表4结果表明,模型组SOD活力显著降低,MDA含量显著升高(均P<001)。　　除人字草低剂量组对血清MDA含量无显著影响外,其他各给药组SOD活力均显著上升,MDA含量均显著下降(P<011 05或P<001)，其中以人字草高剂量组和雷公藤多苷组效果明显。表4各组对IgA肾病模型大鼠血清SOD活力、MDA含量的影响(略)　　3　讨论　　IgA肾病是临床最常见的一种肾小球肾炎,约占复发性肾小球疾病的26％～34％。临床典型症状为与上呼吸道感染相关的肉眼血尿,少数有蛋白尿、高血压及肾功能衰竭,目前病因尚不清楚,因此无特效治疗办法,探索其发病机制并寻求有效的治疗办法是十分必要的。　　本研究结果表明,三叶人字草水煎液能增强小鼠耳廓血液微循环，改善大鼠血液流变学,对于三叶人字草在治疗IgA肾病中扩张肾小球毛细血管,增加肾血流量,改善血液流变学指标,减轻肾小球损害的机制方面具有一定意义。　　本研究结果还表明11 ,模型组血清中SOD活力降低,MDA含量升高,经三叶人字草治疗后,SOD活力均显著上升,MDA含量不同程度下降。SOD是起催化作用的酶质,是最常用的反映抗氧化能力的指标［6］。IgA肾病在发病过程中抗原抗体免疫复合物沉积在肾小球后激活补体系统引起炎症反应。其中,氧自由基起了重要作用,中性粒白细胞和巨噬细胞与免疫复合物接触后除释放裂解基底膜的蛋白酶外,还产生大量氧自由基,激活的粒细胞比静止时产生的活性氧要高10倍。而生物膜中不饱和脂肪酸的脂质过氧化反应的终产物MDA含量可间接反映机体内抗氧化的能力水平［7］。由此可知,氧自由基、脂质过氧化损伤可能参与了IgA肾病的炎症反应,提高抗氧化酶活性,减轻或阻断脂质过氧化链锁反应是治疗IgA肾病的机制之一［8］。IgA肾病大鼠的SOD活性降低、MDA含量升高说明体内抗氧化能力下降,氧自由基产生增多,脂质过氧化反应增强［9］。自由基清除剂的应用有可能减轻IgA肾病症状,防止病变发展。本研究结果提示三叶人字草具有清除自由基,提高抗氧化酶活力，减轻或阻断脂质过氧化链锁反应的作用,可能是其治疗IgA肾病的机制之一。【参考文献】　　［1］HsuSI,RamirezSB,WinnMP,etal.EvidenceforgeneticfactorsinthedevelopmentandprogressionoflgAnephropathy［J］.KidneyInt,2000,57(5)：1818．　　［2］周玖瑶,陈蔚文,黄桂英,等.三叶人字草止血作用研究［J］.中国实验方剂学杂志,2007,13(3)：65．　　［3］周玖瑶,黄桂英,韩坚.三叶人字草抗炎镇痛作用研究［J］.中国医药导报,2007,4(2)：155．　　［4］11 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