可卡因诱导胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡的研究论文

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1、可卡因诱导胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡的研究论文.freelg/kg和25mg/kg组出现细胞凋亡，同对照组相比差异有非常显著性（P0.01），而1.5mg/kg组未出现细胞凋亡。结论使用大剂量可卡因可以导致胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡。【关键词】可卡因神经元凋亡Cocaineinducedcellapoptosisincorticalneuronsoffetalmice【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheroleofcellapoptosisinducedbycocaineentalgroupals

2、receivedphysiologicalsalineofequalvolumesfor15days.Corticaltissuesoffetalmiceovedafter15daysintetry）assayice.ResultsThenumberofapoptoticcellsg/kgand25mg/kg，itg/kgdidnotexpressedapoptosis.ConclusionTheexperimentalresultssuggestthatcocaineexposureatbigdosesleadtosignifi

3、cantapoptosisincorticalneuronsoffetalmice.【Keyl蒸馏水中盐酸可卡因（青海制药厂）1.5mg/kg、15mg/kg、25mg/kg，后两者为重度可卡因服用者的剂量［1］。每天给每只大鼠称重1次，根据体重调整盐酸可卡因的剂量。对照组5只妊娠ANNHEIM公司，蛋白酶K为Sigma公司产品，按试剂盒说明进行检测。结果评定标准：凋亡细胞呈棕黄色颗粒状，位于凋亡细胞核内。光学显微镜观察任意10个视野（400倍）并计算凋亡率。1.3FCM测定分别取实验组和对照组脑组织，制成细胞悬液，于4℃1500

4、r/min离心，5min。弃上清，加入溶红细胞液（7g/L氯化铵，2.6g/LTris-HCl）1ml，4℃1500r/min离心，5min。弃上清，加入70%（体积分数）冷乙醇200ml，重悬，于4℃过夜。4℃1500r/min离心，5min。弃上清，用0.1mol/LPBS(无钙、镁离子)洗涤1次，加入RNaseA（20g/L），于37℃孵育30min，室温1500r/min离心，5min。弃上清，用PBS重悬，加PI液50μl混合，于室温暗处放置，30min内测定。使用COULTEREPICS-XL型流式细胞仪，光源为氩离子

5、激发器，功率为15mSMULTICYCLEVERSION4.0进行数据分析。1.4统计学方法使用SPSS11.0软件，采用t检验。2结果2.1原位缺口末端标记（TUNEL）法检测大脑皮层神经元细胞凋亡率为：实验组A5.2%，实验组B20.6%，实验组C23.5%，对照组4.5%。实验组A和对照组比较差异无显著性（P0.05）。实验组B和对照组比较差异有非常显著性（P0.01），实验组C和对照组比较差异有非常显著性（P0.01）。表明小剂量的可卡因不能使胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡，大剂量可卡因可以诱导胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡。2.

6、2FCM分析细胞分布直方图显示，正常脑组织主要由两类细胞组成，按DNA含量排列在相应的峰道数内，故可见如下3个峰。第1个峰为2C峰（二倍体DNA的细胞群），第2个峰为S期的峰，第3个峰为4C峰（四倍体DNA的细胞群）。FCM分析显示对照组和实验组A分布直方图均以2C峰为主，其次为4C峰。在2C峰之前几乎没有明显的细胞分布（图1）。而实验组B、C胎鼠脑细胞分布直方图则有显著改变。在2C峰之前出现一个明显的小峰，为断裂的DNA，代表了凋亡的细胞数量（图2），为亚二倍体的DNA。并且亚二倍体的DNA含量随可卡因剂量不同而变化，见表1。表

7、1分析实验组和对照组中凋亡细胞(x±s)注：组间比较：*P0.05，ΔP0.05图1对照组胎鼠大脑皮层神经元细胞中仅少量不明显亚单倍体DNA图215mg/kg组胎鼠大脑皮层神经元细胞中亚单倍体DNA明显增多3讨论笔者用TUNEL法检测细胞凋亡。TUNEL法是Gaviel等1992年根据细胞凋亡时DNA断裂的特征而设计的DNA链断端标记技术。它是在末端脱氧核苷酸转移酶的介导下，将生物素化的尿苷三磷酸与DNA链断端结合形成多聚体，再与单克隆抗生物素抗体上多聚体结合。这种结合反应具有特异性，能准确反映DNA断裂的存在，能在单个细胞内观察

8、DNA断端，细胞凋亡发生早期即可用此方法检测出来。通过TUNEL法证明，注射1.5mg/kg小剂量可卡因不能使胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡，而注射15mg/kg、25mg/kg剂量的可卡因可以使胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡。用流式细胞术评价在凋亡过程中