可卡因诱导胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡的研究

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1、可卡因诱导胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡的研究作者：吴岚莹，王华，沈朝斌，戴强，孙金平，顾君，夏尤佳，龚建宏【摘要】目的探讨使用不同剂量可卡因对大脑皮层神经元细胞凋亡的影响。方法实验组每日分别给妊娠Wistar大鼠皮下注射不同剂量的盐酸可卡因15天。对照组每日给予相同剂量的普通生理盐水15天。在可卡因使用的第15天分别取胎鼠大脑皮层组织，用原位缺口末端标记法、流式细胞术检测大脑皮层神经元细胞凋亡。结果在使用可卡因15mg/kg和25mg/kg组出现细胞凋亡，同对照组相比差异有非常显著性，而/kg组未出现细胞凋亡。结论使用大剂量可卡因可以导致胎鼠大脑皮层神经元细胞凋亡。【关键

2、词】可卡因神经元凋亡Cocaineinducedcellapoptosisincorticalneuronsoffetalmice【Abstract】ObjectiveToinvestigatetheroleofcellapoptosisinducedbycocainewithdifferentdoses.MethodsPregnantWistarratsinexperimentalgroupweregivencocainehydrochloridewithdifferentdosesaccordingtobodywEight(Subcutaneouslyinjecte

3、dfor1days).ControlanimalsrecEIvedphysiologicalsalineofequalvolumesfor1days.Corticaltissuesoffetalmicewereremovedafter1daysintwogroups.TUNEL(Insitunickend-labelling)assaywascarriedouttodetectcellapoptosis，FCM(flow-cytometry）assaywascarriedouttodetectcellapoptosisincorticalneuronsoffetalmi

4、ce.ResultsThenumberofapoptoticcellswassignificantlyincreasedincocaineexposureatdosesof15mg/kgand5mg/kg，itweresignificantlydifferentthanthecontrols(PConclusionTheexperimentalresultssuggestthatcocaineexposureatbigdosesleadtosignificantapoptosisincorticalneuronsoffetalmice.【Keywords】cocaine

5、neuronapoptosis据报道在大多数北美的城市中有6%～15%的孕妇可卡因成瘾，近年来国内一些地区也存在孕妇吸毒问题。虽然可卡因对胚胎大脑的致畸作用已充分阐明，但对神经发育过程中出现的混乱仍存在争议。笔者通过动物实验，探讨使用可卡因对胎鼠大脑皮层神经元细胞的损害。1材料与方法动物分组将妊娠Wistar大鼠20只，置于室温℃的清洁级动物室中，自由进食饮水。将其分成两组：实验组和对照组。实验组共15只妊娠Wistar大鼠，分实验组A、实验组B、实验组C，每组5只妊娠Wistar大鼠。给实验组A、B、C每组大鼠分别皮下注射溶解于蒸馏水中盐酸可卡因/kg、15mg/kg

6、、25mg/kg，后两者为重度可卡因服用者的剂量［1］。每天给每只大鼠称重1次，根据体重调整盐酸可卡因的剂量。对照组5只妊娠Wistar大鼠每天给普通生理盐水。此处理持续15天。从每只妊娠Wistar大鼠中分别取出存活的胎鼠3只。并取大脑皮层组织做检测。每组胎鼠各15只。原位缺口末端标记法检测细胞凋亡各组所取组织用10%中性缓冲福尔马林固定，常规石蜡切片。原位细胞凋亡检测试剂盒购自德国BOCKINGERMANNHEIM公司，蛋白酶K为Sigma公司产品，按试剂盒说明进行检测。结果评定标准：凋亡细胞呈棕黄色颗粒状，位于凋亡细胞核内。光学显微镜观察任意10个视野并计算凋亡率

7、。FCM测定分别取实验组和对照组脑组织，制成细胞悬液，于4℃1500r/min离心，5min。弃上清，加入溶红细胞液1ml，4℃1500r/min离心，5min。弃上清，加入70%冷乙醇200ml，重悬，于4℃过夜。4℃1500r/min离心，5min。弃上清，用/LPBS(无钙、镁离子)洗涤1次，加入RNaseA，于37℃孵育30min，室温1500r/min离心，5min。弃上清，用PBS重悬，加PI液50μl混合，于室温暗处放置，30min内测定。使用COULTEREPICS-XL型流式细胞仪，光源为氩离子激发器，功率为15mW，激