医学职称论文写作格式范文：拟胚体法诱导鼠胚胎干细胞形成大脑皮层神经元

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1、医学职称论文写作格式范文：拟胚体法诱导鼠胚胎干细胞形成大脑皮层神经元-->拟胚体法诱导鼠胚胎干细胞形成大脑皮层神经元中文摘要目的定向诱导胚胎干细胞形成大脑皮层神经元方法拟胚体法结果结论关键词ES细胞拟胚体神经分化无血清悬浮培养皮层神经元DirecteddifferentiationoftelencephaliccauticalneuronsfrommouseembryonicstemcellsbyembryoidbodyAbstractObjectiveMethodResultConclusionsKeybryoid

2、body;Neuraldifferentiation;Serum-freesuspentionculture;cauticalneurons前言在胚胎发生期间，端脑原基被细分为Pax6+背侧区域（皮层，可形成皮质，皮质皱褶和脉络丛）和Pax6-腹侧区域（皮下层，可形成基底核）。（Guillemot，2005；Puellesetal.，2000；Ralluetal.，2002）最近，我们研发了一种高效的神经诱导方法，利用无血清悬浮培养技术诱导小鼠ES细胞（mESCs）向神经中枢选择分化。该法可使ES细胞自主发生神经分化

3、，无需外部诱因。重要的是，此种诱导技术能使mESC高频分化为Bf1(FoxG1)+端脑前体细胞，其中大部分细胞表达皮质标记物Pax6，而Shh处理抑制Pax6表达，且诱导皮下层标记物表达，诸如Nkx2.1。本文首先介绍一种改良的三维聚集培养法，此法可高效诱导ESC分化为皮质前体细胞和有功能的投射神经元。.51lunonstratetheinvitrorecapitulationofembryoniccorticogenesisanditsmanipulationa)包被的培养皿上培养，置于37℃,5%的CO2细胞培养

4、箱。其培养基成分为G-MEM(Gibco)中添加1%FBS(Gibco)、10%KSR(Gibco)、2mM谷氨酰胺(Gibco)、0.1mM非必需氨基酸(Gibco)、1mM丙酮酸盐、0.1mM2-巯基乙醇(Gibco)和2000U/mLLIF(Gibco)[1]。ES细胞每隔3d传代1次,传代时用0.05%胰酶(Gibco)37℃消化5min.细胞按照1:2~1:4的比例进行传代.1.3小鼠ES细胞的鉴定免疫荧光1.4小鼠ES细胞向脑皮层神经元的定向分化分化液成分为G-MEM(Gi

5、bco)中添加10%KSR(Gibco)、2mM谷氨酰胺、1mM丙酮酸盐、0.1mM非必需氨基酸(Gibco)、0.1mM2-巯基乙醇(2-ME)，250ng/ml重组人Dkk-1，和1mg/ml重组人Lefty-1(MSB431542)。SFEB法进行神经诱导时，用0.05%胰酶-EDTA将ES细胞消化为单个细胞，以5×104个/ml细胞密度接种在10ml明胶包被培养皿上。细胞1天内凝结成团。接种ES细胞到分化液中的这天定义为第0天。第3天换液。第5天以1-2×102团/cm2细胞密度接种在另包被培

6、养皿上(多聚赖氨酸，层粘连蛋白，纤维结合蛋白)。第7天更换另一种分化液。分化液成分为G-MEM(Gibco)中添加N2、2mM谷氨酰胺(Gibco)、0.1mM非必需氨基酸(Gibco)、1mM丙酮酸盐、0.1mM2-巯基乙醇(2-ME)。重组人BMP-4蛋白、人Dkk-1蛋白、人Lefty-A蛋白、小鼠Nodal蛋白、小鼠Shh-N肽(25–198)和小鼠.,atsuo-TakasakiM.,etal.Self-OrganizedFormationofPolarizedCortica

7、lTissuesfromESCsandItsActiveManipulation.51lunCell,2008,3(5):519-532.[2]GaspardN.,BouschetT.,HourezR.,etal.,Anintrinsicmechanismofcorticogenesisfromembryonicstemcells.Nature,2008,455(7211):351-U10综述