《回回药方》失荅剌知丸对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织fas

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1、失荅剌知丸对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织海马区Fas和FasL表达的影响★左艳丽1于凌志1王晓丽2付慧玲2贾孟辉2，3苏丹1李占涛1（1.宁夏医科大学中医学院宁夏银川7500042.宁夏医科大学第二附属医院宁夏银川7500013.回医药现代化省部共建教育部重点实验室宁夏银川750004）摘要：目的观察失荅剌知丸对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织海马区Fas和FasL蛋白表达的影响。方法将90只SD大鼠随机分为6组：假手术组、脑缺血再灌注模型组（以下简称模型组）、金纳多组、失荅剌知丸低浓度组、失荅剌知丸中浓度组、失荅

2、剌知丸高浓度组。各组缺血模型再灌注12h、24h、72h后断头取脑，并检测Fas和FasL蛋白及FasmRNA和FasLmRNA的表达水平。结果假手术组Fas和FasL的表达最少，模型组表达最多；与模型组比较，用药组各时段Fas和FasL的表达均减弱，以失荅剌知丸高浓度组的表达减弱显著。结论失荅剌知丸对脑缺血再灌注损伤具有较好保护作用，其机制可能与抑制海马区神经细胞凋亡有关。关键词：失荅剌知丸；脑缺血再灌注；Fas；FasL脑缺血可以引起脑组织发生局限性或弥漫性的脑功能障碍，进而诱发神经细胞凋亡和坏死，导致

3、脑组织的损伤。现代医学研究表明，神经细胞凋亡的数量决定着脑组织的梗死体积，并直接关系到疾病的转归和预后。因此，尽早地采取有效的抑制和减少神经细胞的凋亡的方法，对脑缺血疾病的转归具有无疑决定性的重大意义。《回回药方》失荅剌知丸是回医药治疗脑缺血性疾病的传统、经典方药，本课题组前期的系列实验研究业已表明：失荅剌知丸可以激活PI3K-AKT通路的活性，上调PI3K和AKT的表达，抑制神经细胞凋亡；同时可以减少神经毒性，减轻炎症反应[1]，促进抗凋亡蛋白Bcl-2的表达、下调促凋亡蛋白Bax、凋亡执行因子Caspa

4、se-3、9的表达。为进一步探讨失荅剌治丸抑———————————————————————————————————————★基金项目：国家自然科学基金（81260568）；银川市科技攻关课题（2012017）作者简介：左艳丽（1990-），女，在读硕士研究生。研究方向：中医药、回医药防治心脑血管疾病的理论和临床研究。E-mail:524023671@qq.com通讯作者：贾孟辉（1962-），男，主任医师，研究生导师，国基金课题评议专家。主要研究方向：回医药、中医药防治心脑血管疾病的理论及临床研究。E-ma

5、il:JJJ94330@163.com制海马区神经元细胞凋亡的作用机制，本研究开展了失荅剌治丸对大鼠脑缺血再灌注损伤脑组织海马区Fas和FasL表达水平的实验研究。具体结果汇报如次。1材料与方法1.1材料1.1.1实验动物健康SD大鼠，9只，SPF级，雄性，（280±20）g，由宁夏医科大学实验动物中心提供。1.1.2实验药品1.1.2.1失荅剌知丸出自《回回药方考释》，原方组成为柴胡30g，黑诃子30g，芦荟60g，元胡6g，石菖蒲6g，番盐6g，药西瓜9g，松蕈9g，安息香9g，阿魏9g，砂糖15g，干

6、姜3g，胡椒3g，荜拨3g，白芥子3g，芸香3g，巴豆9g，共计213g，以上所有药物切制后，原生药材（除阿魏外）置于2130ml的蒸馏水内浸泡60min，大火煎煮至沸腾后（阿魏后下），改用小火保持微沸状态再煎煮30min，滤取药液，药渣再加入1704ml的蒸馏水，浸泡30min，大火煎煮至沸腾后，小火保持微沸状态再煎煮30min，滤取药液，合并两次药液，放置于恒温水浴锅中分别浓缩至低浓度1.112g/ml、中浓度2.223g/ml、高浓度4.446g/ml，置于4℃冰箱备用。1.1.2.2金纳多即银杏叶提

7、取物（德国威玛舒培公司）规格40mg×20片，临用前配制成1.04mg/ml的混悬液。1.1.3主要实验试剂全蛋白抽提试剂盒（中国南京凯基生物科技发展有限公司KGP250）、SDS-PAGE凝胶电泳试剂盒（中国南京凯基生物科技发展有限公司KGP113）、WesternBlotting检测试剂盒（中国南京凯基生物科技发展有限公司KGP1201）、Fas（中国武汉博士德生物工程有限公司BA0484）、FasL（中国武汉博士德生物工程有限公司BA0049）。1.1.4实验仪器PowerPac™基础电泳仪电源（美国

8、Bio-Rad164-5051）、荧光定量PCR循环仪（美国ABISteponeplusRealtime-PCRsystem）、紫外光度仪（日本SHIMADZUUV-2450）、凝胶成像分析系统（SYNGENEG：BOXChemiXR5）、高速冷冻离心机（德国eppendorf5024R）、分析天平（德国SartoriusBL310/BL21S）1.2方法1.2.1实验分组90只大鼠采用随机数字表法进行分组，随机