高温对小鼠神经元骨架蛋白及热休克蛋白70表达的影响

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1、高温对小鼠神经元骨架蛋白及热休克蛋白70表达的影响作者：耿晓英，万琪，杨荣军，吴松笛【关键词】高温；神经元；骨架蛋白；热休克蛋白质70【Abstract】AIM:Toobservetheeffectsofhyperthermia(39℃)ontheexpressionsofskeletonprotEin(βtubulin)andheatshockprotEIn70(HSP70)ofcorticalneuronsinvitroculturedandexploretheneuroprotectiveeffectofHSP70.METHODS:Thecerebra

2、lcorticalneuronsofembryonicmiceiagroupperature(39℃)for30min.Theimmunofluorescenceandlaserscanningconfocalimagingepoints(0,2,6,24,72h)afterhyperthermia.RESULTS:Thefluorescenceintensityofβtubulininhyperthermiagroupeergroupainedahighlevelfor24h.TheexpressionofHSP70iaandthenincytoplasm

3、astimeiamayleadtothestructuralchangeofthecerebralcorticalneuronprobablythroughinfluencingskeletonproteinstructure.HSP70maybeinvolvedintheprotectionofneuronsinhyperthermia.【Keyia;neurons;skeletonprotein;Heatshockproteins70【摘要】　目的：观察39℃环境对体外培养的小鼠皮层神经元骨架蛋白(βtubulin)和热休克蛋白70（HSP70）表达的影

4、响，探讨HSP70的神经保护作用.　方法：　取小鼠胚胎大脑皮层进行神经元原代培养，将培养好的神经元分为37℃培养的对照组和39℃刺激30min后0,2,6,24和72h的高温组.分别进行荧光免疫染色，应用激光共聚焦扫描观察神经元βtubulin和HSP70的表达.结果：　39℃刺激后，高温组神经元βtubulin荧光强度均低于37℃对照组，且随着恢复时间的延长其荧光强度值逐渐升高.高温组神经元HSP70荧光强度均高于37℃对照组，且随着恢复时间的延长其荧光强度值先升高后降低，于2h时达高峰，24h仍维持在较高的水平.高温可导致HSP70荧光分布转移至细胞核，

5、并随着恢复时间的延长逐渐转移至细胞浆.　结论：　高温可以导致神经元形态变化，骨架蛋白结构紊乱可能是神经元形态变化的重要原因之一，HSP70可能参与并起到保护作用.【关键词】　高温；神经元；骨架蛋白；热休克蛋白质700引言高温环境下，当人体内温度上升到40℃以上时，就会出现中枢神经系统功能障碍如：谵妄、惊厥或昏迷，甚至死亡.但其复杂的详细机制目前仍不清楚.机体在高温环境下受到热应激时，正常的蛋白质合成会受到抑制，但一组高度保守的热休克蛋白（heatshockproteins,HSPs）会迅速合成［1］.热休克蛋白70（heatshockprotein70,HS

6、P70）是热休克蛋白家族中的主要成员之一，是重要的分子伴侣.在各种细胞器中，核仁和细胞膜对热刺激特别敏感，HSP70广泛存在于细胞骨架和核骨架内.为了探讨高温环境下神经元HSP70和βtubulin表达的变化，我们采用体外培养的神经元，模拟高温环境，应用激光共聚焦扫描方法观察了高温刺激对神经元HSP70和βtubulin表达的影响，并初步探讨其可能的生物学意义.1材料和方法1.1材料①动物：孕15～18d昆明种二级孕小鼠由第四军医大学实验动物中心提供（陕动字003号）.　②主要试剂和仪器：胎牛血清（美国Gibco公司）；DMEM/F12（美国Gibco公司）

7、；胰蛋白酶（美国Sigma公司）；多聚赖氨酸（美国Sigma公司）；小鼠抗人βtubulinmAb（美国USBiological公司）；山羊HSP70多克隆抗体（美国SantaCruz公司李新民教授惠赠）；全自动可调水浴加热器，激光共聚焦扫描仪（BioRadMRC1024）.1.2方法1.2.1细胞培养及热应激损伤模型的建立将小鼠引臼脱颈处死，消毒后剖开腹部，取出胎鼠，体视显微镜下分离胎鼠大脑脑泡外侧部的皮质，剪碎脑组织，经含1.25g/L的胰酶消化(37℃,30min)，800rpm/min，离心5min,弃上清，200mL/L胎牛血清的DMEM/F12终

8、止消化，吸管反复吹打，分散组织制成细胞悬液，以完全培