短期学习记忆对小鼠脑组织内热休克蛋白表达的影响论文

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1、短期学习记忆对小鼠脑组织内热休克蛋白表达的影响论文【关键词】热休克蛋白质70ExpressionofHSPinthemousebrainaftershorttermlearningandmemory【Abstract】AIM:Toinvestigatetheassociationofheatshockproteins(HSP70andHSP27)learningandmemory.METHODS:Thirtymicelydividedinto3groups:Trainedgroup（TG）,smin

2、gcontrolgroup（SC）andblankcontrolgroup（BC）.Aftershorttermtraining,themicemunohistochemicalmethodpus,cerebralcortexandnucleusamygdalainshorttermtrainedgroup,alittleexpressioninSCgroupandhardlynoexpressioninBCgroup.ButnoHSP27expressionaybeacriticalmolecul

3、einvolvedinshorttermlearningandmemory.【Keyemory;Morrisaze;heatshockproteins70;heatshockproteins27;immunohistochemistry【摘要】目的：建立小鼠短期学习记忆模型，研究热休克蛋白70(HSP70)、热休克蛋白27(HSP27)是否参与学习记忆过程.方法：采用Morris水迷宫建立学习记忆模型，同时设立游水对照组及空白对照组.训练结束后处死小鼠，取脑，灌注固定脑组织，冰冻切片，免疫组化染色检

4、测脑组织中HSP70,HSP27的表达情况.结果：学习记忆模型组小鼠的海马、杏仁核簇及大脑额叶皮质高表达HSP70，游水对照组HSP70免疫阳性细胞数较少,空白对照组HSP70几乎无表达；HSP27在各组均无表达.结论：HSP70可能是参与学习记忆的重要分子之一.【关键词】学习；记忆；Morris水迷宫；热休克蛋白质70；热休克蛋白质27；免疫组织化学0引言学习和记忆的机制至今不明.热休克蛋白（heatshockprotein,HSP）是一种在应激状态下产生的保护性蛋白质.freel，高度50cm.

5、水深27cm，平台置于水面下0.5～1cm.水温（21±1）℃.采用视频图象处理系统记录小鼠寻找平台的时间及轨迹图.参照Schimanski［1］的Morris水迷宫小鼠学习记忆模型建立方法，分为三个阶段训练小鼠.训练前期：将小鼠放置于平台上，使其脱离平台后，在水中自由游泳30s，然后引导其到平台上.期间变换平台位置，共进行3次实验；训练期：将平台固定在一个象限的中点，每只动物从其它三个象限的任意位置头面向池壁释放入水.记录动物游上平台的时间及轨迹图.若60s内小鼠未找到平台，人工将其引导至平台，并

6、使其停留30s，将游泳时间记录为60s.共进行4d实验,8次/d，前4次实验为一组，后4次实验为一组.组与组之间间隔时间约1h，组内给予小鼠数分钟休息时间；空间探索期：在训练期最后一次实验结束之后，撤除平台，让小鼠在池中游泳60s，用于测试小鼠学会寻找平台后对站台的记忆能力.学习记忆组完全按照上述方法行水迷宫实验,游水对照组与学习记忆组配对，水中不放置平台，使其游泳时间一致，也分4d在同一时间进行.空白对照组在实验期间一直置于正常饲养环境中.实验在10：00～16：00进行，结束后将动物送回饲养室.

7、空间探索实验结束后24h用10g/L戊巴比妥钠麻醉小鼠，开胸，暴露心脏，先用生理盐水10mL冲洗血液，然后用预冷的40g/L的多聚甲醛(pH=7.4)固定液40mL灌注固定完毕后取出全脑，后固定12h，再将脑放入200g/L的蔗糖溶液中,4℃过夜,组织块完全沉底后，用冰冻切片机连续冠状切片（冰冻切片机，Leica）,厚度14μm.1.2.2免疫组织化学检测采用生物素酶标链霉亲和素原理(即SP法)进行免疫组织化学检测（SP9003试剂盒，宝信公司）.具体步骤如下，组织切片室温滴加30mL/L的H2O2

8、，以阻断内源性过氧化物酶活性，加入试剂A(封闭用正常兔血清工作液)，孵育13min，分别加山羊HSP70,.freelin，以上各步骤间PBS充分冲洗.DAB棕色法显色，脱水、透明、封片.用无关抗体和PBS作替代或空白对照.细胞质棕黄色为阳性信号.每组随机取6张切片，每张切片取3个高倍视野（×40），进行阳性细胞计数.统计学处理：学习记忆组Morris水迷宫实验结果采用逐步回归分析法，免疫阳性细胞计数结果用x±s表示，用t检验进行组间比较，SPSS11.0软件进行处理