谷氨酰胺对缺血再灌注肝脏热休克蛋白70基因表达的影响

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1、谷氨酰胺对缺血再灌注肝脏热休克蛋白70基因表达的影响刘国平，冯晓东，朱闻溪，杨广顺，周文平，程广明【摘要】目的探讨谷氨酰胺（Gln）对缺血再灌注肝脏热休克蛋白70（HSP70）基因表达的影响及其对肝脏的保护作用。方法雄性DA）的含量，采用RTPCR法检测肝组织HSP70mRNA的表达。结果再灌注后2、4、24小时，3组MDA、ALT、AST、LDH及TNFα水平与2组相比均显著降低（P0.05），而3组肝组织HSP70mRNA表达显著高于2组和1组（P0.05）。结论Gln能够促进肝组织HSP70基因的表达，减轻肝缺血再灌

2、注损伤，抑制炎症因子释放。【关键词】热休克蛋白70；谷氨酰胺；缺血再灌注；肝脏Abstract：ObjectiveToinvestigatetheinfluenceofLglutamineontheexpressionofHSP70mRNAinliveranditsprotectiveroleagainstischemia/reperfusiondamage.MethodsOnehundredandtaleDAinlivertissueeasured.ThelevelsofserumTNFαconcentrationsof

3、ALT,AST,LDHistryautoanalyser.TheexpressionlevelsofHSP70mRNAinhepatictissueerasechainreaction.ResultsparedRNAexpressioninliverfromgroup3group1andgroup2at2hours,4hours,24hoursafterreperfusion(P0.05).ConclusionGlnpresupplementcouldalleviatetheischemia/reperfusioninjury

4、ofliverandinhibitthereleaseofproinflammatoryfactorsafterthepringle＇smethod,ightberelatedotingtheexpressionofHSP70mRNA.Keyine;ischemiareperfusion;liver通过启动内源性保护反应来增强肝脏本身的耐受性，是减轻缺血再灌注损伤最理想的方法。热休克蛋白（HSP）是一种细胞自我保护性蛋白，促进HSP表达是启动内源性保护反应的关键所在。目前，对于预防性应用谷氨酰胺（Gln）是否可促进HSP70表

5、达和减轻机体继发性损害报告甚少，且存在着争议〔1-3〕。其作用机制如何也不明确。因此，本研究拟探讨Gln对缺血再灌注肝脏HSP70基因表达的影响及其作用。材料与方法1实验动物分组及处理雄性DA）及HSP70mRNA表达的测定。2主要试剂LGln(上海康达氨基酸厂)；MDA及总蛋白定量试剂（双缩脲）（南京建成生物研究所），试剂配置序号参照说明书；TNFα采用夹心法ELISA检测试剂盒(上海森雄科技实业有限公司)测定；大鼠HSP70引物参照Genebank〔TaKaRa（大连）公司合成〕序列为（扩增片段为354bp）：5’A

6、ACGTGCTGCGGATCATCAA3’（上游引物）,5’CTGGATGGACGTGTAGAAGT3’（下游引物）；内参照磷酸甘油醛脱氢酶（GAPDH）引物〔TaKaRa（大连）公司合成〕序列为（扩增片段为528bp）：5’ACCACCATGGAGAAGGCCGG3’（上游引物）,5’CTCAGTGTAGCCCAGGATGC3’（下游引物）；Trizol总RNA提取试剂（美国Promega公司）；逆转录试剂盒、DNAMarket(M)及PCR扩增所需的其他试剂〔TaKaRa（大连）公司〕；电泳用聚丙烯酰胺、三羟

7、甲基氨基甲烷（Tris）及琼脂糖等（上海化工生物工程公司）。3检测方法血清ALT、AST、LDH含量采用岛津CL7150全自动生化分析仪测定；血清TNFα、肝脏MDA含量分别采用ELISA方法、硫代巴比妥酸法测定，操作步骤按试剂盒说明书进行；每组在各个时点分别随机选取5只大鼠的肝标本，采用RTPCR法检测肝组织HSP70mRNA的表达。4统计学处理数据结果均以均值±标准差表示，统计学差异性检验采用SPSS11.5统计软件进行完全随机设计方差分析，样本之间采用LSD法进行两两比较。结果1血清ALT、LDH、AST水平的变化

8、再灌注后2、4、24小时，3组ALT、LDH、AST水平明显低于2组（P0.05）；2组则明显高于1组（P0.05）（见表1）。2肝组织MDA水平的变化再灌注后2、4、24小时，3组肝组织MDA水平明显低于2组（P0.05）。再灌注后2、4小时,2组MDA水平明显高于1组（P