海带热休克蛋白70基因体外原核表达研究.pdf

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1、第30卷第5期浙江海洋学院学报(自然科学版)Vo1．30No．52011年9月JournalofZhejiangOceanUniversity(NaturalScience)Sep．，2011文章编号：1008—830X(2011)05—0386—06海带热休克蛋白7O基因体外原核表达研究付万冬L2，姚建亭2，段德麟2(1．浙江省海洋开发研究院，浙江舟山316100；2．中国科学院海洋研究所，山东青岛266071)摘要：在前期研究克隆得到全长海带HSP70基因的基础上，为进一步研究藻类HSP70的生物学功能，

2、将海带HSP70基因的开放阅读框区域克隆到表达载体pEASY—E2中，并转化到大肠杆菌BL21(DE3)pLysS。将阳性重组子培养于含有AMP(100U／mL)的LB培养基，IPTG诱导表达，SDS—PAGE电泳鉴定。经5h诱导，其表达量达到平台期，继续培养HSPT0表达量并不显著增高。5mMIPTG诱导海带HSP70蛋白表达量高于1mMIPTG诱导蛋白表达量。关键词：海带；热休克蛋白70；分子克隆；原核表达中图分类号：R392．11文献标识码：AStudyonProkaryoticExpressionof

3、L／．,amimnarilagilaponicaHeatSh11oOcCkKPfroteiln710UFUWan-dong2YAOJian-ting2，DUANDe-lin2(1．ZhejiangMarineDevelopmentResearchInstitute，Zhoushan316100；2．InstituteofOceanology，ChineseAcademyofSciences，Qingdao266071，China)Abstract：Ontheearlystageworkofcloningful

4、llengthcytosolicLaminariajaponicaheatshockprotein70(LJHSP70)，tofurtherstudythebiologicalfunctionofseaweedHSP70invivoandinvitro，theopenreadingframeofLJHSP70genewassubclonedintoexpressionvectorofpEASY—E2．TherecombinantplasmidwastransformedtoEcolBL21fDE3)pLysS

5、．ThepositiverecombinantwasculturedinLBmediawith100U／mLampicillin．inducedbyIPI’GanddeterminedbySDS—PAGE．TheresultshowedthattheexpressionlevelofLJHSP70reachedhighlevelafter5hofinduction，afterthattheexpressionlevelincreasedveryslowly．TheexpressionlevelofLJHSPT

6、0at5mMIGwashigherthanthatat1mM．Keywords：Laminariajaponica；Heatshockprotein70；molecularcloning；Prokaryoticexpression热休克蛋白是一组在结构上高度保守的蛋白质，广泛存在于原核和真核细胞中，正常隋况下与应激条件下都发挥重要的生理功能，但在胁迫条件(包括热激、物理、化学和生物等胁迫因子)下，HSPS表达量显著增加。HSPs参与维持蛋白质空间构象，保护细胞生命活动，折叠和跨膜运输新生的蛋白，修复错误折叠的

7、蛋白，帮助降解变性的蛋白，稳定细胞骨架和核骨架、增加细胞的抵抗能力等功能。收稿日期：2011-05—06基金项目：浙江省自然科学基金项I~t(Y3100437)；国家科技支撑计划项目(2008BAC49B01)作者简介：付万冬(1979一)，男，浙江台州人，博士，工程师，研究方向：海洋生物资源综合利用．Tel：0580—8138900通讯作者：段德麟．E-maihdlduan@ms．qdio．ac．ca第4期付万冬等：海带热休克蛋白7O基因体外原核表达研究HSP70是热休克蛋白家族中重要成员，广泛分布于细胞核

8、、细胞质、内质网、线粒体和叶绿体等细胞的各个部分【3】。HSP70在生物对逆境的适应，对减轻逆境胁迫引起的伤害和帮助生物度过不良环境中起到很大的作用。作为分子伴侣参与所有细胞内蛋白质的从头合成和定位、蛋白质的加工和错误折叠蛋白质的降解及其调节过程，因而在正常条件或胁迫条件下，对于细胞的功能和代谢都起到重要的作用M。海带是潮间带典型的褐藻，有重要的经济价值和生态价值。固着藻类随潮汐变化，无法逃脱不利的