高效液相色谱法测定龙胆花中4种活性成分的含量的论文

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1、高效液相色谱法测定龙胆花中4种活性成分的含量的论文【摘要】　　目的建立反相高效液相色谱法同时测定龙胆花中落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的含量。方法采用zorbaxsb－cm18（250mm×4.6mm,5μm）色谱柱；流动相甲醇和水（含0.04%磷酸）为15∶85的比例洗脱；检测波长为238nm；流速1ml·min-1；柱温30℃。结果4种成分均达到基线分离，落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷、獐牙菜苷的线性范围分别为0.10～6.25μg(r=0.9999)，0.076～3.5μg(r=0.9998)，0.04～5.65μg(r=0.9999)和1.2

2、7～7.62μg(r=0.9998)；平均回收率分别为99.2％(rsd=2.6％,n=5)，103.0％(rsd=1.5％,n=5)，101.0％(rsd=1.1％,n=5)，99.7％(rsd=3.6％,n=5)。结论该方法测定快速，结果准确、可靠。【关键词】反相高效液相色谱落干酸獐牙菜苦苷龙胆苦苷獐牙菜苷龙胆花　　abstract：objectivetoestablishaquantitativemethodofsimultaneousdeterminationofloganicacid,sarin,gentiopicrosideandshemslb

3、yrp-hplc.methodsthesamplenofzorbaxs-c18(250mm×4.6mm,5μm)andelutedethanoland,theflol·min-1，andthecolumntemperaturearin，gentiopicrosideandsethodisrapidandprecise.　　keyarin;gentiopicroside;shemsl藏药龙胆花为龙胆科植物蓝玉簪龙胆gentianaveitchiorumhemsl的花，藏名“榜间”，具有清湿热、泻肝胆实火、镇咳、利喉、健胃功能,主治感冒发烧、目赤咽痛、肺热咳嗽

4、、胃炎、脑膜炎、尿道炎、气管炎、阴痒及阴囊湿疹、天花等［1］。.龙胆花主要含有裂环环烯醚萜苷类活性成分，如落干酸（loganicacid）、獐牙菜苦苷(sarin)、龙胆苦苷(gentiopicroside)和獐牙菜苷(sm×4.6mm,5μm）色谱柱；kq3200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。獐牙菜苦苷、龙胆苦苷对照品购自中国药品生物制品检定所；落干酸、獐牙菜苷对照品由本实验室自行分离得到，经归一化法测定，纯度大于98％；甲醇为色谱纯，磷酸为分析纯，水为自制三重蒸馏水。龙胆花2007-08采于青海省果洛州玛沁县，由青海普兰特藏药研究所孙洪发研究

5、员鉴定，阴干后粉碎过80目筛，冷藏保存。　　2方法与结果　　2.1色谱条件　　色谱柱为zorbaxsb－c18（250mm×4.6mm,5μm）；流动相为甲醇∶水（含0.04%磷酸）为15∶85；流速1ml·min-1；检测波长238nm；柱温30℃。该色谱条件下落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷4种成分均被洗脱且达到基线分离。色谱图见图1。　　　2.2对照品溶液的制备　　分别精密称取适量的落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷对照品，用甲醇溶解，置10ml的容量瓶中定容，摇匀作对照品溶液备用。使用时稀释为所需浓度。　　2.3供试品溶液的制备精密称取粉

6、碎至80目的样品0.5g，加入甲醇15ml，超声提取40min，抽滤，以甲醇洗涤滤渣两次，1ml/次。重复上述操作，所得滤液与前一次滤液合并，浓缩后，用甲醇定容于50ml容量瓶中。过0.45μm滤膜，在选定色谱条件下测定有效成分的含量。　　2.4线性关系考察　　分别精密量取适量4种对照品储备液，置2ml容量瓶中，用甲醇定容于刻度，得混合对照品标液系列溶液。取混合对照品标液系列溶液分别进样10μl，按“2.1”项下的色谱条件进行测定，各组分进样量(μg)与峰面积a的线性方程及相关系数见表1。表14种活性成分的线性方程及线性范围（略）　　2.5检测限　　在选定

7、的色谱条件下，当信噪比s/n＝3时，对各组分最低检测限进行测定，结果表明，落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的最低检测限分别为0.56，0.25，0.45，0.84ng。　　2.6精密度实验按“2.1”项下的色谱条件，取10μl混合对照品溶液进样，测定色谱峰的峰面积，计算得4种活性成分的rsd分别为0.93%，0.81%，0.56%和1.2%(n=5)，表明仪器精密度良好。　　2.7稳定性实验精密称取样品0.5g，按“2.1”项下的色谱条件，分别于当日、次日及第3天进样分析，测定落干酸、獐牙菜苦苷、龙胆苦苷和獐牙菜苷的峰面积，计算得rsd分别为1.2%

8、，1.6%，1.3%和2.1%，表明供试品溶液3d内稳定。　　2.