高效液相色谱法测定苦胆草胶囊中龙胆苦苷的含量论文

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1、高效液相色谱法测定苦胆草胶囊中龙胆苦苷的含量论文【摘要】目的建立苦胆草胶囊中龙胆苦苷含量测定方法。方法采用高效液相色谱法，色谱柱：迪马C18色谱柱，甲醇－水（30∶70）为流动相，检测波长270nm。结果龙胆苦苷在0.04972～1.4916μg之间线性关系良好，r=0.99998，回收率为97.7％，RSD为1.3％。结论该方法操作简单，分离效果好.freelg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5ml置25ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。2.1.2供试品溶液的制备取重量差异项下的内容物适量，研细，混

2、匀，取约0.5g，精密称定，置50ml量瓶中，加甲醇40ml，超声处理40min，放冷，加甲醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液3ml，置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，作为供试品溶液。2.1.3阴性对照液的制备照处方比例制备缺龙胆的苦胆草胶囊，照“2.1.2”项下操作，制备阴性对照液。2.2色谱条件色谱柱：迪马C18(4.6mm×200mm，5μm)，流动相：甲醇-水（30∶70），检测波长：270nm，流速：1ml·min-1，柱温：30℃，进样量：供试品溶液、对照品溶液、阴性液各5μl，在此色谱条件下，龙胆苦苷可与其它成分

3、基线分离，阴性组分无干扰。结果见图1。2.3线性范围的考察分别精密吸取龙胆苦苷对照品（浓度为0.04972mg·ml-1）1，2μl和龙胆苦苷对照品（浓度为0.09944mg·ml-1）2，5，10，15μl对照品溶液注入液相色谱仪中，按前述色谱条件在270nm波长处测定，以进样量为横坐标，以色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理，方程为：Y=1937112X-3060（r=0.99998）,可见，龙胆苦苷进样量在0.04972～1.4916μg范围内，线性关系良好。2.4精密度实验照样品项下实验方法进行提取，精密吸取同一供试品

4、溶液（批号050601），连续进样6次，测定色谱峰面积，RSD为0.7％，表明精密度良好。2.5稳定性实验考察照样品项下实验方法进行提取，精密吸取同一供试品溶液（批号050601）5μl，分别于配制后0，4，6，8，12h测定峰面积，RSD为0.8%，结果显示，供试品溶液制备后12h内基本稳定。a-样品色谱图b-阴性样品色谱图c-龙胆苦苷对照品色谱图1.龙胆苦苷图1苦胆草胶囊中龙胆苦苷含量测定色谱图（略）2.6重复性实验照样品项下实验方法进行提取，精密称取供试品（批号050601）6份样品，各0.5g，分别按样品测定项下方法操作，结果

5、RSD为1.1％。表明本品测定方法重复性良好。2.7加样回收率实验采用加样回收实验方法，取供试品（批号050601）含龙胆苦苷为22.5416mg·g-1的样品约0.12g，置25ml容量瓶中，分别精密加入龙胆苦苷对照品溶液（C=0.6366mg·ml-1）5ml，加入甲醇15ml，按样品含量测定方法操作。测定结果见表1。表1龙胆苦苷含量测定回收率实验（略）2.8样品含量测定分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各5μl，注入液相色谱仪，测定。结果见表2。表2不同批号中龙胆苦苷含量测定结果（略）3讨论本实验比较了超声20，30，40min

6、不同时间龙胆苦苷的提取率，结果40min提取的得率与50min的相同，因此确定提取时间为40min。将对照品龙胆苦苷适量溶于甲醇中，进行光谱扫描，在波长270nm处有最大吸收，故选定270nm为龙胆苦苷的检测波长。龙胆苦苷的含量测定方法已有文献报道［4～6］。本文建立的方法具有样品处理简单的特点，本品含量测定理论板数按龙胆苦苷苷峰计算应不低于3000时，样品分离良好。采用本方法测定龙胆中龙胆苦苷的含量，样品分离良好且准确、简便、迅速。【