高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验

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1、高效液相色谱法测定清肝胶囊中龙胆苦苷的实验【摘要】目的建立高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷方法以C18反相柱为色谱柱，甲醇水为流动相。检测波长270nm，用乙酸乙酯和甲醇混合液作提取剂。结果平均回收率为98.38%。r=0.9995,线性关系良好。结论此方法灵敏、准确，适用于龙胆苦苷的测定。【关键词】高效液相色谱法清肝胶囊龙胆苦苷龙胆为龙胆科植物，其根及根茎含龙胆苦苷，龙胆苦苷具有清肝解毒、消食健胃的功效。用高效液相色谱法（HPLC）测定复方制剂中的龙胆苦苷，其操作步骤简便，样品回收率高，重现性好，

2、结果可靠，现报道如下。1仪器与试药1.1仪器　　紫外分光光度计（日本岛津UV-260）；高效液相色谱仪（AG）；薄层层析点样台TLC-SP-1（西安市秦西机械厂）；离心机800型（江苏医用设备仪器厂）；微量进样器（上海医用激光仪器厂）。1.2试药　　中性氧化铝（100～200目）（上海五四试剂厂）；硅胶GF254（青岛海洋化工厂）；龙胆苦苷对照品（中国药品生物制品检定所）；乙酸乙脂、甲醇、氯仿均匀为分析纯（上海试剂一厂）。2含量测定2.1色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅胶为填充剂；甲醇水（3：7）为流

3、动相；检测波长为270nm。理论板数按龙胆苦苷峰计算应不低于3000。取清肝胶囊样品5份，精密称量，分别加入一定量的龙胆苦苷对照品，照含量测定项下的方法分别测定含量，计算回收率。3.3精密度实验3.3.1样品测定精密度实验取清肝胶囊样品6份，每份5g，照含量测定项下的方法试验，分别测定含量。3.3.2薄层层析精密度试验取清肝胶囊样品5g，照含量测定项下的方法试验，在6块薄层板上点样［２］，每块板上点2个点，测定含量。3.4紫外光谱试验　　取清肝胶囊与空白龙胆制剂各5g，分别照含量测定项下的方法制备供试品溶

4、液，照分光光度法试验，在200～350nm间进行重叠扫描。结果表明，在270nm处，制剂中其它原料几乎不影响龙胆苦苷的测定。3.5标准曲线的制备　　取龙胆苦苷对照品约400mg，照含量测定项下的方法绘制标准曲线。回归方程为Conc=17﹒856A-0.0275，r=0.9995，曲线通过原点，线性相关较好。4讨论　　采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷的含量，样品的预处理是关键。在工艺上采用连续回流提取方法提取龙胆苦苷［３］，至提取液近无色时，可提尽龙胆苦苷。其残渣经薄层层析检验，无龙胆苦苷斑点。提

5、取液浓缩后加入水，龙胆苦苷转溶于水中，过滤，可除去提取中带来的脂溶性杂质；水溶液经氧化铝层析柱，甲醇洗脱，大部分色素等杂质被吸附［４］，而龙胆苦苷被洗脱下来。柱层析洗脱过程中，采用100ml甲醇洗脱，龙胆苦苷几乎全部洗下来。（fw.nseac.）　　采用薄层层析方法，用硅胶GF254板分离，荧光熄灭法定位，龙胆苦苷斑点清晰，有利于刮板。　　通过试验证实，采用高效液相色谱法测定清肝胶囊中的龙胆苦苷，方法准确、稳定、可靠。