高效液相色谱法同时测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因的含量论文

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1、高效液相色谱法同时测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因的含量论文王雨梅杜瑞芳刘卫东马丽【摘要】目的建立百金花中龙胆苦苷（gentiopicrin）和咖啡因（caffeine）的高效液相色谱测定方法。方法采用ODS柱，流动相为甲醇-水（30∶70），检测波长273nm。结果该法回收率龙胆苦苷为97.76％，咖啡因为102.30％；RSD龙胆苦苷为2.97％，咖啡因为1.75％（n=6）。结论该方法建立同一色谱条件下测定百金花中龙胆苦苷和咖啡因，简便、准确，为百金花蒙药植物资源的进一步开发提供了可靠的依据。【关键词】百金花龙胆苦苷咖啡因高效液相色谱Ab

2、stract：ObjectiveToestablishanHPLCmethodfordeterminationofgentiopicrinandcaffeineinHerbaCentaurii.MethodsTheseparationedonKromasilC18Column(250mm,.freelm×5μm)andthemobilephaseethanol-.ResultsTherecoveryrateofgentiopicrinandcaffeineethodisrapidandaccuratefordeterminationofge

3、ntiopicrinandcaffeine.ItcanbeusedforfurtherexploitationofMongolianherbalresources.Keymeyeri(Bunge)Druce的干燥带花全草，蒙文名“森达日阿－其其格”.freelmeyeri(Bunge)Druce的带花全草。2方法与结果2.1色谱条件KromasilC18色谱柱（250mm×4.6mm，5μm,100A）；流动相为甲醇-水（30∶70）；检测波长273nm；体积流量1.0ml/min；柱温为室温；进样量20μl。在此条件下供试品中龙胆苦苷成分

4、、咖啡因成分能与其他成分达到较好分离（见图1）。图1对照品（a）及样品（b）的HPLC色谱图（略）2.2对照品溶液制备精密称取龙胆苦苷对照品和咖啡因对照品适量，分别加流动相制成每毫升含咖啡因100μg和龙胆苦苷200μg的溶液。精密量取上述对照品溶液各2.0ml，置10ml量瓶中，加流动相制成每毫升含咖啡因20μg和龙胆苦苷40μg的混合对照品溶液。2.3供试品溶液制备取本品粗粉约0.2g，精密称定，置25ml量瓶中，加入流动相适量，超声处理20min，放冷，流动相补足至刻度，摇匀，滤过，续滤液即为供试品溶液。2.4标准曲线制备取咖啡因对照

5、品约10mg，龙胆苦苷对照品约10mg，精密称定，分别置100ml和50ml量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取咖啡因对照品溶液0.25，0.5，1.0，2.5，5.0ml和龙胆苦苷对照品溶液0.5，1.0，2.0，5.0，10.0ml，分别置于25ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，分别测定峰面积。以对照品峰面积Y为纵坐标，相应对照品的量X(μg)为横坐标，得龙胆苦苷回归方程为：Y=3E+06X－7974.9，r=0.9999，线性范围0.0828～1.6563μg；咖啡因回归方程为Y=7E+06X－19651，r=0.99

6、99，线性范围0.021568～0.43136μg。2.5精密度实验对照品混合溶液，重复进样5次，测定峰面积。结果龙胆苦苷峰面积RSD为1.12％，咖啡因峰面积RSD为1.27％。2.6稳定性实验取同一供试品溶液，间隔一定时间进样，依法测定峰面积。结果咖啡因峰面积RSD为1.03%（n=5）；龙胆苦苷峰面积RSD为0.32%（n=5）。结果供试品溶液在8h内稳定。2.7重复性实验取同一批药材5份，按供试品溶液制备方法操作，分别测定龙胆苦苷、咖啡因峰面积，计算含量。结果龙胆苦苷含量RSD为2.09%，咖啡因含量RSD为0.48%。2.8加样回

7、收实验精密称取已知含量的药材样品0.1g，分别精密加入一定量的龙胆苦苷及咖啡因对照品，按供试品溶液制备方法进行测定并计算回收率，结果龙胆苦苷平均回收率为97.76％，RSD为2.97%(n=6)，咖啡因平均回收率为102.30％，RSD为1.75%(n=6)。2.9样品测定取不同批次的百金花药材粉末，按“2.3”项下方法处理，进样测定。结果见表1。表1百金花中龙胆苦苷和咖啡因的含量测定结果（略）3讨论在《中国药典》Ⅰ部2005年版收载的“龙胆”“秦艽”及“龙胆泻肝丸”中均测定龙胆苦苷［2］，检测波长分别是270和254nm，我们针对龙胆苦苷

8、、咖啡因进行紫外光谱扫描，发现在（273±2）nm处有最大吸收，因此将273nm作为检测波长。提取药材时，先后以30％甲醇为提取溶媒，分别尝试超声提取60min、回流提取60mi