反相高效液相色谱法测定野菊花中蒙花苷的含量

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1、反相高效液相色谱法测定野菊花中蒙花苷的含量王伯涛王锋张同波王惠民【摘要】　　目的建立野菊花中蒙花苷的含量测定方法。方法采用反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，在室温下，C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）；甲醇-水-冰醋酸（52∶46∶2）为流动相；检测波长334nm。结果蒙花苷的线性范围0.05～2.5μg，r=0.9999（n=10）；平均回收率99.2%，RSD＝2.4%（n＝6）。结论该法可作为野菊花药材的质量评价方法。【关键词】野菊花；蒙花苷；含量测定；高效液相色谱法　　Abstract：Ob

2、jectiveToestablishamethodforthedeterminationofthecontentoflinarininFlosChrysanthemiIndicibyRPHPLC．MethodsThechromatographicconditionincludedaC18column（250mm×4.6mm，5μm）andthemobilephaseconsistingofmethanol-onitoredat334nm．ResultsThecalibrationcurveethodcanbeus

3、edforthequalitycontrolofFlosChrysanthemiIndici．　　KeyiIndici；linarin；Contentdetermination；RPHPLC　　野菊花为菊科植物野菊ChrysanthemumindicumL.的干燥头状花序，性微寒、味苦辛，归肝、心经。功能清热解毒，主治疔疮痈肿，目赤肿痛，头痛眩晕。野菊花主含黄酮类化合物，并以蒙花苷的含量最高〔1～5〕。在《中国药典》（2005年版）修订起草时，笔者建立了RP-HPLC法测定其中蒙花苷含量的方法，取得了满意的效果。

4、由于现版药典《起草说明》未能公开发行，故而将有关研究结果报道如下，以供参考。　　1器材　　VARIAN高效液相色谱仪，ProStar215泵，ProStar410自动进样系统，ProStar310检测器，VarianStar5.5色谱工作站。Shimadzu高效液相色谱仪，LC10AD泵，SPD　-10A检测器，美国AnaStar色谱工作站。Hanbon-7C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）：江苏汉邦科技有限公司；DiamonsilTMC18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm）。VARIANCAR

5、Y50Probe紫外分光光度计，CaryETTLERAG135、AB204－N电子天平。YB－Z真空恒温干燥箱：天津药典标准仪器厂。　　流动相用甲醇、乙腈为色谱纯，水为注射用水。试药均为分析纯。试液按《中国药典》2000年版Ⅰ部附录方法配制，一般溶液按常规方法制备。　　野菊花对照药材（0995200002）、蒙花苷对照品（1528-200101）：中国药品生物制品检定所。　　野菊花药材为全国各地药检所提供的商品药材样品及中国药品生物制品检定所标本馆馆藏标本。　　2方法与结果　　2.1实验条件的选择　　2.1.1回

6、流提取时间取本品粗粉1g，置500ml烧瓶中，加甲醇200ml，加塞，称定重量。水浴加热回流30min（从沸腾起开始记时，下同），立即于冷水中冷却，密塞，称定重量，用甲醇补足减失的重量。摇匀，密塞，放置5min。吸取上清液5.0ml于大小适宜的容器中，作为样1，密塞备用。原溶液密塞，称定重量。再于水浴加热回流30min，如法操作，循环5次，分别获得样2～样5，密塞备用。　　上述实验重复4次。得：样11～样15、……、样41～样4～5，共20份试样。各试样微孔滤膜(0.45μm)过滤，弃去初滤液，收集续滤液照“

7、2.9样品测定”项下方法测定蒙花苷峰的峰面积。　　各实验以第5份试样（最后一次取样）的峰面积为100%，分别计算第1至第4份试样的峰面积百分数。见表1。　　　　取4次实验均值，以时间为横坐标，峰面积百分数为纵坐标作曲线图。见图1。　　表1回流提取时间与提取率（略）　　图1回流提取时间与提取率曲线（略）　　图2流动相中蒙花苷UV吸收光谱（略）　　由图1，表1可知，样品回流提取至第5次、回流提取时间总计达到2.5h时，蒙花苷的浓度基本不再增加，即可认为提取完全。为确保充分提取，供试品溶液的回流提取时间拟定为3h。　　2

8、.1.2色谱条件　　2.1.2.1检测波长取上述蒙花苷对照品溶液，加流动相稀释至适宜的浓度。以流动相为空白，在400～250nm范围内扫描吸收光谱。见图2。　　由图2可知，蒙花苷在流动相中最大吸收波长为334nm。所以测定时检测波长选择334nm。　　2.1.2.2流动相实验了以下几种流动相系统：①乙腈水冰醋酸（40∶59∶1）、（20∶79∶1）、（2