野菊花总黄酮及蒙花苷含量测定方法研究

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1、野菊花总黄酮及蒙花昔含量测定方法研究吕定刚(广西桂林市兴安县人民医院541300)【摘要】目的研究野菊花总黄酮和蒙花昔含量的测定方法。方法选取不同产地的野菊花药材作为研究对象，分别利用紫外分光光度法和HPLC法测定总黄酮和蒙花昔含量。结果经测定，不同来源的野菊花在具体的总黄酮和蒙花昔含量上差异较显著，其中，蒙花昔和总黄酮含量均相对较高的野菊花大多来自安徽和湖北地区。结论在测定野菊花中总黄酮和蒙花昔的具体含量的时候，可以釆用HPLC法和紫外分光光度法，且最终的测定结果较为准确可靠，可为临床评估药草质量提供有力的依据。【关键词】野菊花总黄酮蒙花昔含量测定方法【中图分类

2、号】R927.1【文献标识码】A【文章编号】1672-5085(2013)35-0013-02木研究中，笔者选取不同产地的野菊花药材作为硏究对象，分別利用紫外分光光度法和HPLC法测定总黄酮和蒙花昔含量。现将研究结果进行如下报告。1材料与用品1.1材料选取不同产地(安徽、湖北、河北等地)的野菊花干燥花蕾若干作为研究对象，并由西南大学植物学教研室王海洋教授鉴定，确定为野菊(ChrysanthemumindicumL.)的干燥花蕾。1.2仪器(1)高效液相色谱仪:型号LC—20AB(SPD-20紫外检测器，日本岛津);(2)紫外分光光度计：型号U-3010(H木日立)

3、；(3)电子天平：型号EL-2046(梅特勒一托利多仪器有限公司)；(4)电热恒温水浴锅：型号HHSYZI・NI(北京市风仪器仪表公司)。1.3试药蒙花昔对照品（中国药品生物制品检定所，批号111528-200303）,水为自制重蒸水，乙腊和甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。2方法2.1蒙花昔含量测定[1,2,3]2丄1溶液制备（1）供试样品溶液制备：取野菊花药材粉末0.25g左右，置于锥形瓶中，添加100mL甲醇，加塞，称定重量后加热冋流3h。自然冷却室温，添加甲醇补足减失重量。摇匀后劲滤过，得续滤液备用。（2）对照品溶液制备：于量瓶中放置5mg蒙花昔对照品，添加

4、甲醇后进行超声溶解。2.1.2色谱条件用高效液相色谱仪测定对照品和供试品的色谱图，具体结果如下图所示。图1色谱图1蒙花甘A对照品B供试品2.1.3线性试验精密吸取浓度为24.20μg/mL的蒙花昔对照品溶液2,5,10,20,30μL,利用高效液相色谱仪进行测定。得岀回归方程，经计算可得，如果进样量在0.04840〜0.7260μg之间的时候，蒙花昔会呈线性变化。2.1.4稳定性利用2.1.1中的方法进行溶液制备，然后室温下静置，分别于0,2,4,6,8,12h进行测定。计算二者的色谱峰峰面积RSD,经计算可得对照品蒙花昔为0.54%,供试品为0

5、.87%o2.1.5重复性另取同样的样品，按照浓度的高、中、低进行划分，并采用同样的方法每浓度制备3份供试品溶液，测定蒙花昔含量。计算3个浓度的RSD平均值，经计算为1.89%o2.1.6冋收率实验设高、中、低3个浓度，分别制备3份供试品溶液，在不同浓度进行测定。计算不同浓度的平均冋收率数值，经计算可得为97.1%,RSD为2.19%。2.1.7测定样品取适量药材，制备供试品溶液后测定蒙花背含量，n=3o最终结果如表1所zjO不同产地野菊花中蒙花昔含量(23)编号采集吋间来源原植物蒙花井含量(%)RSD(%)110.10.27安徽采集野菊花1.430.76210

6、.11.06湖北采集野菊花1.810.43310.11.03湖北采集野菊花1.670.98410.11.06安徽采集野菊花3.371.10510.10.28湖北采集野菊花2.250.59610.11.03江苏采集野菊花0.250.37710.11.01河南采集野菊花0.491.24810.10.29购买甘菊0.450.86910.11.04购买甘菊0.310.511010.11.10河北采集甘菊002.2总黄酮含量测定[4,5,6]221溶液制备(1)对照品溶液：于量瓶中放置5mg蒙花昔对照品，添加适量乙醇后进行超声溶解，放置备用。(2)供试品溶液：精密称定0.2

7、5g左右野菊花药材粉末,添加适量甲醇，并经滤过、洗涤、甲醇冋收，然后AB・8大孔吸附树脂纯化法来去除供试品中的绿原酸。再经过洗脱，洗脱完毕之后，得到洗脫液，置于量瓶中备用。2.2.2选择测定波长将80%乙醇作为空白对照，对供试品溶液和对照品溶液进行紫外光谱扫描,波长范围200〜400nm,结果显示测定波长为326nm。2.2.3曲线绘制在326nm处进行吸光度测定,得出冋归方程，经计算可得如果在8.49μg/mL~19.81&mu禺/mL之间的吋候，蒙花昔会呈线性变化。2.2.4重复性试验另取同样的样品，按照浓度的高、中、低进行划分，并采用同样的方法每浓度制

8、备3份供试