实验性胸腹撞击伤后血浆tnfα、il1基因水平的变化特点及意义

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1、实验性胸腹撞击伤后血浆TNFα、IL1基因水平的变化特点及意义【关键词】撞击伤;胸部损伤;腹部损伤;DNA;RNA　　Abstract：ObjectiveTostudythecharacteristicsandclinicalsignificanceabouttheDNAandRNAlevelofTNFαandIL1beforeandafterthoracoabdominalimpactinjury.MethodsAthoracoabdominalimpactinjurymodelinalimpactinjuryeasure

2、dbythePCRandRTPCRtechnology.ResultsTheDNAandRNAlevelsincreasedinutesafterinjury(P﹤0.01).TheincreasedDNAandRNAleveldecreased8hoursafterimpactinjury.Butitallevelbeforedeath(P﹤0.05).ConclusionThechangeoftheDNAandRNAlevelofTNFαandIL1afterthoracoabdominalimpactinjuryhasch

3、aracteristics,suchasquickliness,highsensitivity,highspecificity,simplemeasurement,goodsteadiness.Monitoringitschangesishelpfulforpredictingtheprognosisofthoracoabdominalimpactinjury,eclinicalreferencevalue.　　Keypactinjury;thoracicinjury;abdominalinjury;DNA;RNA　　胸腹撞击伤在平时

4、多见于交通事故、高处坠落及工矿事故等，其往往损伤脏器多，伤情复杂，常继发多器官功能障碍综合征(MODS)，对机体生理功能影响大，是严重创伤的主要死亡原因。本研究旨在通过建立胸腹伤动物模型的基础上，对伤后血浆中TNFα和IL1的DNA和RNA水平变化进行动态监测，研究其变化规律和特点，为临床在胸腹伤的救治中防治MODS提供有价值的实验依据。　　材料与方法　　1动物模型制备　　选择健康成年新西兰兔12只(第三军医大学大坪医院实验动物中心提供)，雌雄不限，兔龄8～10个月，体重2.5～3.0kg，将其随机编为1～12号。用3%戊巴比妥钠(

5、1ml/kg)耳缘静脉注射麻醉后取仰卧位，将实验动物置于BIMⅣ型生物撞击机下(第三军医大学大坪医院全军战创伤中心研制)，采用2个重362.8g，直径4.4cm的钢球自撞击机钢管1m高处以自由下落方式对动物右侧胸壁及上腹部剑突处撞击致伤[1]。撞击过程的动力学参数如下：　　撞击动能E=mgh≈7.111Jg=9.8m/s2　　撞击速度V=2gh≈4.427m/s　　撞击动量MV=0.716×V≈3.212kg.m/s　　自由落体运动时间T=2×19.8≈0.452s　　2指标监测　　2.1用RM6240型四道生理记录仪监测呼吸、心率、

6、血压等生命体征。　　2.2血浆DNA和RNA的反转录多聚酶链反应(RTPCR)半定量监测：按照试剂盒说明进行，肿瘤坏死因子α(TNFα)的引物序列:上游5’GCTGAGCCAGCGTGCGAACG3’、下游5’CAGGTACTCAGGCTGGTTGA3’,扩增出340bp的cDNA片段;白细胞介素1(IL1)的引物序列:上游5’GGATGACGGCCTGAGAACTT3’、下游5’TCACGCAGGACAGGTACAGA3’，扩增出305bp的cDNA片段。退火温度为53℃;内参照选用βactin寡核苷酸引物序列：上游5’A

7、CGATGCTCCAAGAGCTGTT3’、下游5’TCAGGCAGCTCATAGCTCTT3’，扩增出660bp的cDNA片段，退火温度为51℃。基因及内参照βactin引物序列购自重庆升博生物科技公司。取同一样品总RNA2μg，按试剂盒说明进行，产物的检测在琼脂糖凝胶上电泳,凝胶成像系统拍摄。　　3损伤评估　　按实验要求对伤后12只实验动物采取活杀或死亡后进行大体解剖，详细检查和记录肝脏、肺、心损伤的类型、特点、严重程度以及有无其他脏器的合并伤。对肝、肺脏器损伤按美国创伤外科学会1994年修订的(AAST)[2]分级标准和AIS

8、90评分[3]进行分级和评分。　　4特异性实验　　RNA具有组织特异性，以12例实验兔伤前和伤后外周血标本为模板进行扩增反应后相比较，差异明显(P﹤0.01)说明有特异性。　　5敏感度实验　　血液中RNA含