三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞smmc 7721的诱导分化作用

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1、三氮唑席夫碱衍生物对人肝癌细胞SMMC7721的诱导分化作用【关键词】三氮唑席夫碱衍生物；肝细胞癌；细胞增殖；细胞分化　　【Abstract】AIM:Tostudytheeffectof3pyridin3yl4［（4hydroxy3methoxybenzylidene）amino］5methylsulfanyl4H［1,2,4］triazole(LH37)ontheinductionofdifferentiationofhepatocarcinomaSMMC7721cells.METHODS:SMMC7721cellsinedbyMTTass

2、ay.Cellmorphologyicroscopy.Thereversetranscriptasepolymerasechainreaction(RTPCR)RNA.Thespecificactivitiesofalkalinephosphatase(ALP)ethod.RESULTS:Thecellproliferationol/Lindosedependentmanners.1×10-5mol/LLH37inducedthemorphologicalnormalityofSMMC7721cells.Aftertreatedol/Lor1×10-6mol/LLH

3、37,themRNAexpressionofαFParkablydeclined(P<0.01).CONCLUSION:LH37mayinhibitproliferationandinducedifferentiationofhumanhepatocarcinomaSMMC7221cells.　　【Keya；cellproliferation;celldifferentiation　　0引言　　三氮唑类衍生物具有抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞分化的作用［1-2］，但含杂环席夫碱类的该衍生物目前少见报道.经结构修饰，我们得到了新的三氮唑席夫碱衍生物-LH37

4、.本研究利用人肝癌SMMC7721细胞株，初步探讨该化合物对癌细胞增殖和诱导分化的影响，希望获得能够诱导肿瘤细胞分化的候选物，为进一步开发和应用提供依据.　　1材料和方法　　1.1材料　　1.1.1诱导剂LH37是具有1，2，4三氮唑骨架结构的3吡啶3基4［（4羟基3甲氧基苯亚甲基）氨基］5甲硫基1，2，4三唑（图1），由河南大学药物研究所提供.纯度>99%，二甲基亚砜（DMSO）溶解.　　1.1.2细胞株和主要试剂　　肝癌细胞株SMMC7721（中国医学科学院基础医学研究所）生长在含100mL/L胎牛血清（天津灏洋生物制品公司）的R

5、PMI1640培养基（Gibco公司）中.四甲基偶氮唑蓝（MTT），MMLV逆转录酶，Oligo(dt)15和RNasin(Promega公司)；DMSO(Solarbi公司)；维甲酸（RA）(美国Sigma公司)；金氏法碱性磷酸酶检测试剂盒(北化康泰试剂有限公司).其余试剂为国产分析纯.　　1.1.3引物合成甲胎蛋白(αFP)和βactin引物序列引自文献［3，4］，均由上海生工生物工程公司合成.　　1.2方法　　1.2.1MTT试验　　细胞以1×104/L接种到96孔细胞培养板，0.2mL/孔，继续培养24h后换液，同时加入LH37.LH37按倍比稀释方式加入

6、，最高浓度为1.024×10-3mol/L，最低浓度为1.6×10-5，共7个浓度梯度（每个浓度5个复孔），对照组只加培养液.MTT试验按照文献［5］的方法进行.　　1.2.2形态学观察　　SMMC7721细胞以1×105/L浓度接种于含盖玻片的6孔培养板中培养24h，1×10-5mol/LLH37处理细胞96h后取出盖玻片，瑞氏染色，显微镜观察，对照组只加培养液.　　1.2.3αFPmRNA表达检测　　SMMC7721细胞培养至对数生长期加入各种药物，其中用1×10-5mmol/LRA作为阳性对照；用DMSO（与LH37等体积）排除溶剂的干扰作用；LH37选用

7、1×10-5mol/L和1×10-6mol/L两个浓度；阴性对照组不加药.继续培养48h弃去培养液，采用异硫氰酸胍酸性酚氯仿抽提法提取总RNA.逆转录合成cDNA第一链，直接用于PCR扩增.人αFP上下游引物序列分别为5′ATTCAGACTGCTGCAGCCAA3′和5′GTGCTCATGTACATGGGCCA3′,PCR产物为475bp.βactin上下游引物序列分别为5′GCACTCTTCCAGCCTTCCTTCC3′和5′TCACCTTCACCGTTCCAGTTTTT3′，PCR产物为