内皮抑素联合放射对人肺腺癌a549细胞的作用

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1、内皮抑素联合放射对人肺腺癌A549细胞的作用【摘要】目的研究放射联合内皮抑素对肺腺癌细胞系A549的作用以及对血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法①以不同浓度的内皮抑素与A549细胞作用不同时间，MTT法选择生长抑制率≤20%的药物浓度(IC20);②将细胞分为对照组，单纯照射组，单纯用药组，药物与照射联合组，联合组分3个亚组，分别为加药培养24h、48h及72h后再照射2Gy。比较细胞存活分数,选择最佳药物作用时间;③用200mg/L药物浓度作用实验组，药物作用48h后X线0、2、4、6、8Gy剂量照射，绘制细胞存活曲线，与单纯照

2、射组比较，计算增敏比(SER);④ELISA法检测各组细胞上清液中VEGF值。结果200mg/L浓度内皮抑素的放射增敏作用在药物作用48h后最为明显，增敏比为1.61、1.04;放射联合内皮抑素可降低肺癌细胞放射治疗后VEGF水平的表达。结论内皮抑素对离体非小细胞肺癌A549细胞系具有放射增敏作用，且最佳照射时间为药物作用后48h，其增加放射敏感性可能的机制为降低肿瘤细胞VEGF的水平。【关键词】癌;非小细胞肺;细胞系;肿瘤;内皮抑素;放射增敏ABSTRACT:ObjectiveTostudythesynergisticeffectofen

3、dostatin(YH16)andirradiationonhumannonsmallcelllungcancer(NSCLC)celllineA549andtheexpressionlevelofvascularendothefialgroe.Theoptimalconcentrationgiving≤20%inhibitionconcentration(IC20)byMTTassayotherapyalone,radiotherapyalone,andradiochemotherapygroup.Allgroupsent,thec

4、ellssurvivalfractionandtheplatingefficiencyofthefourgroupsprovidedtoselecttheoptimalradiotherapydosage.③Theradiochemotherapygrouphadbeenexposedtoendostatinfor48hours,follog/LendostatinculturemediumthevalueofSERradiatedbylinearacceleratorin2Gyafter48hecoulddecreasetheVEGFl

5、evel.ConlusionItissuggestedthatendostatinenhancestheradiosensitivityofNSCLCA549celllineinvitro(SER=1.61,1.04).Theenhancementdependsonthetimeofexposuredrug.Theoptimalradiationtimeshouldbe48hourafterexposure.　　KEYI1640培养液，胰蛋白酶为InvitrogenGibco公司产品。胎牛血清购自杭州四季青生物公司。噻唑蓝(MTT)为Si

6、gma公司生产。人VEGFELISA试剂盒购自深圳晶美生物工程有限公司。　　1.2细胞培养A549培养于PRMI1640培养液(含mL/L热灭活小牛血清，青霉素100mg/L及链霉素100mg/L)中，置于37℃，50mL/LCO2饱和湿度培养箱中培养。细胞经过2.5g/L胰蛋白酶消化传代，取对数生长期的细胞进行实验。　　1.3MTT法检测内皮抑素对A549细胞的毒性选取对数生长期的A549细胞接种于96孔板，经胰酶消化，血球计数板上计数，确保活细胞在97%以上，调整细胞浓度2×104/mL，100μL每孔，加入96孔培养板中。将培养板放

7、入37℃，50mL/LCO2培养箱培养，待细胞贴壁后取出，加入不同浓度内皮抑素，使其终浓度为500、100、50、25、10、5、1、0.5、0.1g/L。每个浓度设置5个复孔。同时设空白对照组和调零孔。培养板放回培养箱中分别继续培养24、48、72h。取出培养板每孔加入50μLMTT(5g/L)。再将培养板放回培养箱中培养4h。吸出上清液以PBS洗涤1次，加入150μLDMSO。在平板摇床摇10min使甲臜完全溶解。用酶标仪测490nm波长处的吸光度值(A)，实验重复3次，取平均值。按照下式计算各个药物浓度的细胞存活抑制率：抑制率=(PB

8、S对照组A490-药物组A490)/PBS对照组A490×100%。以不同药物浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线。　　1.4最佳照射时间(T)的测定取生长良好的A5