蓬甲饮治疗子宫内膜异位症sd大鼠的作用机制探讨

《蓬甲饮治疗子宫内膜异位症sd大鼠的作用机制探讨》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、蓬甲饮治疗子宫内膜异位症SD大鼠的作用机制探讨【摘要】目的探讨蓬甲饮治疗子宫内膜异位症的作用机理。方法建立子宫内膜异位症大鼠模型,应用免疫组化法检测凋亡调节蛋白Caspase-3、Survivin在诱发性子宫内膜异位症动物模型的异位、在位内膜中的表达,从免疫的角度研究蓬甲饮、乌丹丸治疗子宫内膜异位症的作用机制。同时,用TUNEL法检测出细胞的凋亡率。结果与空白组比较,蓬甲饮低、中、高剂量组及乌丹丸组Caspase-3的表达增加(P<0.05),与空白组比较,蓬甲饮中、高剂量组及乌丹丸组Survivin的表达减少(P<

2、0.05)。结论蓬甲饮和乌丹丸均增加Caspase-3的表达,降低Survivin的表达,促进细胞凋亡。【关键词】蓬甲饮；乌丹丸；细胞凋亡；子宫内膜异位症；动物模型　　Abstract：ObjectiveToexplorethemechanismofPengjiayinpreparationinthetreatmentofectopicendometriuminSDrats.MethodsTostudythemechanismofC溶解,配成每1mL含有效煎煮生药量2.656g的浓度(即高剂量的给药浓度),高压消毒灭菌,置于-4

3、℃冰箱中保存待用。乌丹丸(原名异位痛经丸),北京中医药大学东方医院院内制剂,由丹参、桃仁、三棱、延胡索、莪术、细辛、水蛭、赤芍、牡丹皮、苏木、鳖甲、穿山甲等22味药物组成,水泛成丸,具有活血化瘀、消癥散结、理气止痛之功效,已在临床应用20多年。84g/瓶,北京中医药大学东方医院制剂室提供,批号：(98)京卫药制字[052]第F-1264号。将药丸磨成细粉,配成每1mL含有原药材2.992g的浓度,高压消毒灭菌,置于-4℃冰箱中保存待用。　　1.2　动物　　体重为(200±10)g未交配的健康雌性SD大鼠42只,购自北京维通利华实

4、验动物中心,随机分为5组,即空白对照组、蓬甲饮高剂量组、蓬甲饮中剂量组、蓬甲饮低剂量组、乌丹丸组。　　1.3主要试剂　　羧甲基纤维素钠(CMC)：北京精求化工有限责任公司提供,批号3405005。原位细胞死亡检测试剂盒；PV-6001辣根酶标记羊抗兔多聚体；PV-6002辣根酶标记羊抗小鼠多聚体；兔抗鼠Caspase3抗体(1∶100稀释)；鼠抗人Survive抗体工作液；DAB显色剂(3-8试剂购于北京中山生物技术有限公司)。　　1.4造模　　造模前2d每天给造模组大鼠肌肉注射2mg/mL的苯甲酸雌二醇0.1mL/(kg·d)

5、以诱导大鼠发情,正常对照组大鼠肌注0.9%氯化钠溶液0.1mL/(kg·d)以相同刺激。腹腔注射10%水合氯醛0.35mL/100g以麻醉大鼠。开腹找到子宫,切下左侧子宫角长约1cm,行端对端吻合术。将剥离的子宫内膜组织1.5cm×0.5cm大小的内膜块,缝合在右侧子宫系膜。剩余内膜组织进行组织学检查,以证实植入物为子宫内膜。缝合切口。　　1.5分组及给药　　将造模大鼠随机分为5组：空白对照组8只,乌丹丸组9只,蓬甲饮高剂量组9只,中剂量组8只,低剂量组8只。造模组大鼠平均体重无显著差异性。乌丹丸组和蓬甲饮中剂量组大鼠每千克体重

6、给药量相当于成人每千克体重服药量的8倍。乌丹丸组大鼠每日灌服乌丹丸溶液29.92g/kg(1mL/100g)；蓬甲饮高剂量组大鼠每日灌服蓬甲饮26.56g/kg(1mL/100g)；中剂量组大鼠每日灌服蓬甲饮1mL/100g,浓度稀释为高剂量组的1/2；低剂量组大鼠每日灌服蓬甲饮1mL/100g,浓度稀释为高剂量组的1/4。空白对照组每日灌服CMC1mL/100g。各组大鼠均每天固定时间给药,给药4周后,大鼠剩余37只,其中空白对照组8只、蓬甲饮高剂量组8只、中剂量组7只、低剂量组7只、乌丹丸组7只。　　1.6免疫组化法分析Ca

7、spase-3及Survivin蛋白的表达　　给药4周后,于末次给药1h后取材,取在位、异位内膜,多聚甲醛-戊二醛固定,制备石蜡切片标本。将标本置于37℃恒温干燥箱中烘烤2h后进行免疫组化染色。按SP法染色。参照阳性对照、阴性对照,细胞质或/和细胞膜呈现棕黄色颗粒反应者为阳性,无棕黄色颗粒反应者为阴性。每组选5例染色良好的切片,在显微镜放大40倍下观察,每张切片随机选取5个视野,共25个视野摄入计算机。测量每个视野阳性染色区域的表面积密度,最后计算每组的平均值。　　1.6统计学方法　　实验数据应用SPSS10.0统计软件进行统计

8、,各组均数间的差异性用t检验判定,有效率的差异性用卡方检验判定。　　2结果　　(见表1～表４)表1各组大鼠在位内膜与异位内膜细胞凋亡率比较(略)注：与空白组比较,*P<0.05；与乌丹丸组比较,#P<0.05(下同)。表2Caspase-3在在位内膜