木黄酮对体外培养的hsct6细胞基质金属蛋白酶

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1、木黄酮对体外培养的HSCT6细胞基质金属蛋白酶【摘要】目的以雌二醇(E2)作为阳性对照，观察植物雌激素木黄酮(GST)对体外培养的HSCT6细胞基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)基因表达的影响。方法E20.1μmol/L浓度作为阳性对照，GST0.5、5、50μmol/L浓度分别作用于HSCT6细胞36h，以RTPCR方法测定其对HSCT6细胞TIMP1基因表达的影响。结果E2浓度组和GST各浓度组均对HSCT6细胞TIMP1基因表达有明显的抑制作用，其中GST各浓度组作用呈一定剂

2、量相关性。结论GST各浓度组均可抑制HSCT6细胞TIMP1基因表达水平，从而促进胶原降解，可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。【关键词】肝纤维化雌二醇植物雌激素木黄酮基质金属蛋白酶抑制因子肝星状细胞　　ABSTRACT:ObjectiveByusingestradiol(E2)aspositivecontroltoobservetheeffectsofgenistein(GST)onthematrixmetalloproteinaseinhibitor1mRNAlevelsofHSCT6celli

3、nvitro.MethodsHSCT6cellsol/LandGST0.5-50μmol/Lfor36hours.TheTIMP1mRNAlevelseasuredbythequantitativereversetranscriptionpolymerasechainreaction(RTPCR).ResultsTheTIMP1mRNAlevelsofHSCT6cellsatdifferentconcentrationsofE2andGSTalcontrol(P<0.01).P1mR

4、NAlevels.ConclusionTheantifibroticmechanismofGSTispartlyduetoitsdoRNAlevelsofHSCT6cells.　　KEYP)的表达，使基质金属蛋白酶(matrixmetalloproteinase,MMP)的活性增强，抑制肝维化的产生[13]。而木黄酮(genistein,GST)作为植物雌激素的一种主要成分具有多种生理功能，木黄酮在结构上与哺乳动物的雌激素雌二醇相似，具有雌激素的活性基团二酚羟基[4]，其化学结构决定化学性质，所

5、以GST具有类雌激素活性等多种生物活性。它不仅是一种有效的抗氧化剂，还是一种有效的酪胺酸蛋白激酶抑制剂。本实验以E2作为阳性对照，应用RTPCR方法进一步观察GST对体外培养的HSCT6细胞TIMP1基因表达的影响。　　1材料与方法　　1.1细胞系肝星状细胞系HSCT6由美国加利福尼亚旧金山总医院肝病研究中心Frideman教授、上海第二军医大学张俊平教授惠赠。系SV40转染的大鼠肝星状细胞，具有活化的HSC表型[5]。　　1.2药品、试剂与仪器木黄酮和雌二醇冻干粉购自美国Sigma公司；含酚红

6、的高糖型DMEM液体培养基、无酚红的高糖型DMEM液体培养基购自Hyclone公司；总RNA提取试剂盒、逆转录盒、Markers和琼脂糖均为Promega公司产品；梯度PCR仪为美国Sigma公司产品；采用Bandscan图象分析软件。　　1.3方法　　1.3.1药液配制GST冻干粉5mg以DMSO(370μL)溶解，制成浓度为50mmol/L的贮存液，使用前新鲜配制，用含5%体积分数血清的无酚红的高糖型DMEM培养液稀释至0.5、5、50μmol/L浓度；E2冻干粉3mg以DMSO(8760μL)溶解

7、，制成浓度为1mmol/L的贮存液，使用前新鲜配制，用含5%体积分数血清的无酚红的高糖型DMEM培养液稀释至0.1μmol/L浓度，均4℃避光保存。　　1.3.2细胞培养HSCT6细胞于37℃快速复苏，用含10%体积分数胎牛血清的含酚红高糖型DMEM培养液接种于50mL细胞培养瓶中，在37℃，5%体积分数CO2及饱和湿度下培养，隔天换液，每日于倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况，待细胞生长至80%-90%密度时，给予传代，取生长状态良好细胞用于实验。　　1.3.3药物干预取对数生长期培养细胞HSCT

8、6，待细胞生长融合后，加入GST或E2，以不同浓度分组(GST不同浓度组：0.5μmol/L；5μmol/L；50μmol/L，E2浓度组：0.1μmol/L)，E2组作为阳性对照组，同时设未加任何药物的阴性对照组以及1‰DMSO对照组，进行下一步检测。　　1.3.4RTPCR检测HSCT6细胞TIMP1mRNA的表达步骤如下：①提取RNA；②cDNA的合成：采用20μL逆转录反应体系，内含2μL总RNA，随即引物1μL，5×RTbu