木黄酮对人垂体腺瘤细胞增殖的影响

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1、木黄酮对人垂体腺瘤细胞增殖的影响　　摘要:目的观察木黄酮（genistein，GST）对培养的人垂体腺瘤细胞增殖的影响.方法将GST作用于体外培养的人垂体腺瘤细胞，测定MTT值及3H-TdR参入量，并用流式细胞仪测定细胞周期.结果不同浓度的GST（10-7，10-6和10-5mol・L-1）明显抑制垂体腺瘤细胞的增殖，MTT的A490nm值变化率分别为（91.2±4.9）%，（78.8±5.3）%和（65.8±5.6）%，（P<0.01），cpm值的变化率分别为（88.6±3.6）%，（75.5±5.7）%和（5

2、8.9±4.9）%，（P<0.01），并存在着剂量效应.10-5mol・L-1的GST可使G1期细胞比例从对照组的68.2%上升为91.0%（P<0.01）.木黄酮对垂体腺瘤细胞的作用与雌激素受体无关.结论GST在体外能明显抑制培养的人垂体腺瘤细胞的增殖.　　Keyacells;invitro　　Abstract:AIMTostudytheinfluenceofgenisteinontheproliferation，DNAsynthesisandcellcycleofculturedhumanpituita

3、rytumorscells.METHODSMTTmethodand3H-TdRincorporationcellcycleanalysisinethechangesofproliferationandDNAsynthesisofhumanpituitarytumorscells.RESULTSInadosedependentman-ner，genisteinatdifferentconcentration（10-7mol・L-1，10-6mol・L-1，10-5mol・L-1）couldsi

4、gnificantlyinhibittheproliferationofhumanpituitaryadenomacellsculturedinvitro.ThechangerateofA490nmvaluevalueol・L-1）increasedtheproportionofcellsinG1phasefrom68.2%upto91.0%（P<0.01）.Moreover，theeffectofgenisteinontheproliferationofculturedhumanpitu-itarytumors

5、cellsanpituitarytumorscells，anditsinhibitoryeffectisindependentofestrogenre-ceptor.　　0引言　　异黄酮（Isoflavones）是一类具有广泛生物活性的植物次生代谢物，不同的异黄酮可分别表现出抗氧化、清除自由基、抗癌及抗菌抗病毒作用［1，2］.木黄酮（genistein，GST）是异黄酮的一种，最初认为其具有雌激素样的作用，最近，人们对于GST潜在的抗癌作用给予了大量的关注和研究.体内、体外实验的大量资料表明，GST对多种肿瘤具有抑制细胞增殖、抑制肿

6、瘤生长及转移等作用，如乳腺癌、结肠癌、性腺肿瘤及皮肤肿瘤等［3，4］，但到目前为止，GST对垂体腺瘤细胞的影响所知不多.因此，我们选择人垂体腺瘤作为研究对象，通过体外实验探讨GST对培养的人垂体腺瘤细胞增殖的影响及其机制.　　1材料和方法　　1.1材料新鲜垂体腺瘤手术标本28（无分泌功能腺瘤10例，催乳素瘤11例，生长激素瘤6例，Cush-ing’s综合征1例）例，均经病理组织学检查确诊.手术取下的瘤组织置于无菌生理盐水中暂时保存.　　1.2主要试剂和药品GST，去甲肾上腺素、胶原酶、胰蛋白酶、DNA酶、MTT（噻唑蓝）、DAB，A

7、BC试剂盒等购自美国Sigma公司;抗雌激素受体α和β的抗体购自美国SantaCruz公司;二甲基亚砜、DF-12培养基购自美国Gibco公司;新生牛血清为杭州四季青生物制品公司产品;3H-TdR购自上海原子能科学研究院.　　1.3垂体腺瘤细胞的分离和培养用DF-12培养液清洗瘤组织3次，剪碎至糊状，分别加入2.5g・L-1胰蛋白酶，6.7mkat・L-1的胶原酶，3.3mkat・L-1的DNA酶各5mL，37℃水浴振摇消化25min，加牛血清，过滤，离心弃上清，加DF-12培养液，轻轻吹起

8、细胞，离心弃上清，加含牛血清的DF-12培养液，轻轻吹起细胞，调整培养液体积，使单位体积的细胞数在5×108・L-1，接种于96孔板，移入CO2孵箱中培养.24h换液，之后每隔48h换液1次.　　1.4MTT试验培养至第