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1、木黄酮对小鼠胰岛β细胞膜电位的影响论文赵玉峰，朱运龙，胡玉珍，周京军，钟延清【关键词】染料木黄酮Effectofgenisteinonmembranepotentialsofmousepancreaticβcellsinvitro【Abstract】AIM:Todeterminetheeffectoflongterminactivationofproteintyrosinekinasesonpancreaticβcells.METHODS:Primarilyculturedmousepancreaticβ
2、cellsmolL-1genisteinfor12hours.Themembranepotentialsofβcellsptechniquesode.RESULTS:Genisteintreatmentsignificantlydecreasedtherestingmembranepotentialsofβcellsundertheconditionofboth2mmolL-1glucoseand0.2mmolL-1diazoxide,theopenerofKATPchannels.Afterstimul
3、atedby15mmolL-1glucose,normalβcellsdepolarizedouseβcellstreatedbygenisteinhadsignificantincreaseinlatentperiodsbeforedepolarization,significantattenuationofactionpotentials,andsignificantelevationinmembranepotentialsatintervalofactionpotentials.CONCLUSION
4、:Longtermtreatmentpairstheresponsesofpancreaticβcellstoglucose,anditisindicatedthatdecreaseintyrosinekinasesactivitycausesthedysfunctionofpancreaticβcells.【Keyembranepotentials【摘要】目的：观察长期降低蛋白酪氨酸激酶活性对胰岛β细胞的影响.方法：原代培养的小鼠胰岛β细胞被0.1mmolL-1木黄酮（蛋白酪氨酸激酶抑制剂）处理12h.
5、采用穿孔式全细胞记录方法记录胰岛β细胞膜电位的变化.结果：在2mmolL-1葡萄糖条件下以及0.2mmolL-1二氮嗪（KATP通道开放剂）的作用下，木黄酮处理组细胞的静息电位均较对照组明显升高.在15mmolL-1葡萄糖的刺激下，小鼠正常胰岛β细胞经短暂的潜伏期后发生去极化，爆发动作电位.freela公司.1.2方法1.2.1小鼠胰岛β细胞原代培养C57BL/6J小鼠被脱臼处死.沿胆总管注射Ⅴ型胶原酶液入胰腺.分离胰腺，37℃消化15min.振摇分散胰腺组织，用密度梯度离心法收集胰岛.胰岛用蛋白酶消化分
6、散为单个细胞［4］.胰岛细胞种植于35mm塑料培养皿中，培养在RPMI1640培养液中.液中加入终浓度为100mLL-1的胎牛血清，1×105UL-1的青霉素和1×105UL-1的链霉素.细胞随机分为两大组，一组为处理组，用0.1mmolL-1木黄酮处理12h，一组为对照组.在实验记录时每组细胞又分为两组，一组用于静息电位记录，一组用于观察葡萄糖诱导的膜电位变化.每组记录细胞数为6个.1.2.2电生理实验采用穿孔式全细胞记录的方法记录胰岛β细胞膜电位的变化.实验中通过灌流系统给药.电极电阻在充满电极内液后
7、为3~5MΩ.电信号采集用Axopatch200A放大器，数据采集用Axoscpoe8.2软件系统.电极与细胞间的巨阻抗（GΩ）封接形成后，细胞被钳制于-70mV，补偿电极的电容电流.在示波器上监测细胞穿孔进展，串联阻抗小于25MΩ被视为细胞穿孔良好，补偿细胞的串联阻抗和细胞电容电流，形成全细胞钳制状态.膜电位记录时，细胞被钳制于-70mV，待形成全细胞状态后，静置细胞10min.然后转变至电流钳制状态，开始信号采集.细胞记录用细胞外液成分为（mmolL-1）:NaCl142.0,KCl4.7,CaCl2
8、2.6,MgSO41.2,KH2PO41.2,NaHCO32,HEPES5,.freelmolL-1）:K2SO476,KCl10,NaCl10,MgCl21,HEPES10,Sucrose36(pH7.3).细胞内液中加入终浓度为0.24gL-1的两性霉素B以在细胞膜上穿孔形成全细胞钳制.统计学处理：各组数据以x±s表示.采用olEndocrinol,1999;22(1):19-28.［3］JonasJC,PlantTD,G
