氯化甲基汞抗裸鼠皮下u251胶质瘤细胞的体内实验研究

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1、氯化甲基汞抗裸鼠皮下U251胶质瘤细胞的体内实验研究：柳影陈儇毕晓颖李志超袁长吉【摘要】目的在建立裸鼠皮下U251胶质瘤模型基础上，通过体内实验及相关形态学研究，分析氯化甲基汞(MMC)的抗脑胶质瘤作用。方法制备裸鼠皮下U251胶质瘤模型，随机分为对照组和实验组，实验组裸鼠注射U251脑胶质瘤细胞1g/kg体重MMC，连续5d，对照组给予相同体积的生理盐水。全部裸鼠于肿瘤接种后14d处死。结果大体病理显示实验组肿瘤体积明显小于对照组，病理组织学观察发现实验组U251胶质瘤细胞生长密度较对照组低，并可见细胞体积变小、核固缩等凋亡

2、的形态学改变。透射电镜显示实验组肿瘤细胞发生核固缩、染色质周边化、核断裂、胞浆空泡变性等改变，实验组瘤体汞含量明显高于对照组。结论MMC对裸鼠U251胶质瘤细胞增殖具有明显的抑制作用，其机制可能是通过诱导胶质瘤细胞凋亡实现的，相关分子机制有待进一步深入研究。【关键词】氯化甲基汞;胶质瘤;细胞增殖;细胞凋亡　　【Abstract】ObjectiveTostudythemorphologychangeinapoptosiseffectofmethylmercuricchloride(MMC)onbrainneuroglioma.

3、MethodsExperimentalgroupg/kgBMCiscapableofinhibitingtheproliferationofratC6neurogliomacellsinvivo.ThepossiblemechanismisthatMMCiscapableofdeducingapoptosisinneurogliomacells.ThemoleculemechanismofinhibitoryeffectofMMConbrainneurogliomaarerequestedforresearchtoadvanc

4、e.　　【Keya;Methylmercuricchloride;Apoptosis;Morphology　目前胶质瘤的治疗仍是以手术为主的综合治疗,但即使接受积极的手术治疗及放、化疗,患者也通常在诊断后1年内死亡，所以目前胶质瘤的二线治疗仍围绕寻找易于透过血脑屏障的有效化疗药物。近些年来，本课题组在探讨氯化甲基汞(MMC)神经毒性作用机制的基础上，根据其结构理化性质、药物动力学特点和多靶点的抗肿瘤特性，提出了用MMC治疗脑胶质瘤的新思路，并通过体外实验初步证实了其对脑胶质瘤的抗肿瘤活性〔1〕。本文拟通过体内实验探讨MMC对

5、裸鼠皮下U251胶质瘤细胞的抗肿瘤活性。　　1材料与方法　　1.1主要试剂MMC(Merck公司)，IMDM细胞培养基、FBS胎牛血清(Gibco公司)。　　1.2动物裸鼠20只，雌雄各半，体重18～20g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，在清洁级条件下进行实验。　　1.3U251胶质瘤细胞培养U251胶质瘤细胞由吉林大学白求恩医学院病理学教研室惠赠，本室保存。U251胶质瘤细胞在含有10%胎牛血清的IMDM培养基中，37℃、5%CO2条件下培养。每天更换1次培养液，在细胞处于对数生长期大约长满80%时，用0.25%胰酶

6、(PBS配制)消化贴壁细胞，收集离心，Hank’s液洗涤3次，制成单细胞悬液，冰浴条件下存放待用。　　1.4裸鼠U251胶质瘤动物模型的建立上述细胞悬液调至细胞浓度为3×105/ml，细胞活力用台盼蓝检测，细胞存活率>90%，用微量注射器吸取上述悬液，每只裸鼠右后肢外侧皮下注射100μl单细胞悬液。　　1.5分组及实验方法上述动物模型随机分为对照组和实验组，实验组裸鼠注射U251胶质瘤细胞1g/kg体重MMC，连续5d，对照组给予相同体积生理盐水。　　1.6肿瘤病理组织学检查两组裸鼠于肿瘤接种后14d处死，取瘤体组织，测

7、量瘤体大小(肿瘤大小=肿瘤长径×短径2×0.5)，部分瘤体置于4%多聚甲醛固定，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，石蜡浸透包埋。采用HE染色法制备肿瘤病理组织学标本，肿瘤组织切片厚度为5μm，石蜡切片常规二甲苯脱蜡，乙醇梯度复水。苏木精染色10min，1%盐酸酒精浸数秒，弱碱性水溶液显蓝。水溶性伊红染色。乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树脂封片，镜下观察肿瘤病理组织学改变。采用常规电镜标本制备方法，用LKBⅢ型超薄切片机制备肿瘤电镜观察标本，醋酸双氧铀及柠檬酸铅双重染色，EM1200EX型透射电子显微镜(日本)观察两组肿瘤的超微结构改

8、变。　　1.7肿瘤内汞含量测定采用VarianSpectorAA220原子吸收分光光度计，用氢化物原子吸收法测定。　　1.8统计学分析应用SPSS13.0统计软件进行分析,组间比较采用t检验。　　2.3肿瘤内汞含量测定对照组肿瘤内汞含量〔(0.0030±0.0020)μg/g