胶质瘤患者树突状细胞在裸鼠体内外诱导抗肿瘤免疫

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1、胶质瘤患者树突状细胞在裸鼠体内外诱导抗肿瘤免疫【摘要】探讨胶质瘤患者树突状细胞（Dendriticcells,DCs）在裸鼠体内外能否诱导抗肿瘤免疫。方法用细胞因子从胶质瘤患者外周血诱导DCs，MTT法检测DCs激活的细胞毒性T细胞（cytotoxicTlymphocytes，CTLs）在体外对肿瘤细胞的作用。将裸鼠接种DCs，1周后用胶质瘤细胞攻击，观察成瘤潜伏期、成瘤率、瘤重量及瘤体积。结果用细胞因子能从患者外周血诱导大量DCs，该DCs激活的CTLs在体外对胶质瘤细胞产生了高效而特异的抑制及杀伤作

2、用。在裸鼠体内，DCs有免疫保护作用，其成瘤率减低，潜伏期延长，瘤重及瘤体积均显著降低。结论胶质瘤患者DCs能在裸鼠体内外诱导高效的抗肿瘤免疫。【关键词】胶质瘤树突状细胞裸鼠【Abstract】ObjectiveToinvestigatepatientsacaninduceantitumorresponseinvivoandnudemice.MethodsDCstheperipheralbloodofpatients.TheantitumoreffectofcytotoxicTlymphocytes(C

3、TLs）,stimulatedbyDCs,iceacells.ResultsDCscouldbeinducedfromtheperipheralbloodofpatientsandtheCTLs,activedbyDCs,couldinduceeffectiveantitumorresponseinvivo.InAddition,DCscouldprotectthenudemiceandtheeoftumorcutdopatientsacaninduceeffectiveimmuneresponseon

4、tumorinvivoandnudemice.【Keya;dendriticcells;nudemouse胶质瘤是颅内常见的肿瘤之一，其发病率及死亡率逐年上升。近年来的研究表明，树突状细胞（Dendriticcells,DCs）在启动、调节并维持肿瘤免疫反应中发挥重要作用【1～3】。本实验通过观察胶质瘤患者DCs体内外抗肿瘤作用，意欲探索胶质瘤免疫治疗新途径。1材料与方法1.1材料细胞因子（IL-4、GM-CSF）购自Glaco公司；CD86、CD1a、HLA-DR、CD54、CD83McAb购自DA

5、KO公司；外周血来自辽宁省锦州市中心医院临床确诊病人；胶质瘤细胞株SK-MG-1购自北京医科大学；SGC-7901人胃癌细胞株、BeL-7402人肝癌细胞株购自中山大学。4周龄BALB/C裸鼠购自北京医科大学。1.2方法1.2.1制备冻融抗原取107个SK-MG-1胶质瘤细胞，加入1ml生理盐水，反复冻融3次后稀释到10ml，微孔滤膜过滤，4℃保存备用。1.2.2制备T细胞及DCs取患者外周血，Ficoll不连续密度梯度离心法分离单个核细胞，孵育2h后收集非贴壁细胞作为T细胞备用，贴壁单核细胞用含GM-

6、CSF（1000u/ml）、IL-4（1000u/ml）、15%FCS的完全培养基培养。3天将细胞分为2组：负载组（加入冻融抗原）、未负载组（加入培养基）。7天收集悬浮细胞即为DCs。用CD86、CD1a、HLA-DR、CD54、CD83McAb标记，流式细胞术检测DCs表面分子。1.2.3DCs激活T细胞将T细胞制成1×106细胞/ml悬液，加入24孔培养板(1ml/孔）。DCs经丝裂霉素处理后按1：20加入到培养体系中。72h后收集细胞即为细胞毒性T细胞（cytotoxicTlymphocytes，

7、CTLs）。1.2.4CTLs杀伤活性试验于96孔板中分别加入SK-MG-1、BeL-7402、SGC-7901细胞作为靶细胞（5000细胞/孔），按10：1分别加入负载组DCs活化的CTLs、未负载组DCs活化的CTLs、未受DCs活化的单纯T细胞，以加入培养基作阴性对照。37℃、5%CO2培养72h，加入MTT继续培养4h，检测OD值。1.2.5裸鼠体内实验18只裸鼠随机分3组,分别接种负载及未负载抗原DCs(2×105个细胞/鼠），生理盐水为对照组。隔日1次，共3次,1周后注射SK-MG-1胶质瘤

8、细胞（2×106个细胞/鼠）。观察成瘤率、潜伏期。接种癌细胞后30天测瘤重、瘤体积（V=肿瘤最长径×最短径2/2）。1.2.6统计学方法所有数据用x±s表示，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有显著性。2结果2.1用细胞因子可以从胶质瘤患者外周血获得大量DCs。流式细胞术分析显示：负载与未负载抗原组DCs均高表达CD86、CD1a、HLA-DR、CD54、CD83等表面分子。2.2DCs对T细胞杀伤靶细胞的影响负载组DCs诱导的CTLs