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时间:2018-11-28
《树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用》由会员上传分享,免费在线阅读,更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用作者:张建芳,于文彬,徐修礼,苏明权,马越云,刘家云,丁振若【关键词】树突状细胞 关键词:树突状细胞;LAK细胞;免疫治疗 摘要:目的建立体外培养扩增树突状细胞(DC)的方法,并观察其诱导的抗肿瘤免疫作用.方法分离外周血单个核细胞,应用GM-CSF及IL-4诱导DC产生,用TNF-α和PGE2促进其成熟,并用肺癌细胞系GLC-82可溶性抗原致敏.将成熟DC与自体LAK细胞混合培养(DC-LAK),用MTT法检测DC-LAK细胞及LAK细胞对多种肿瘤细胞系的杀伤作用.结果经GM-CSF,IL-4,TNF-α,PGE2作用后,细胞表达CD1a
2、阳性率为71.0%,CD8350.0%,CD14阳性率低于10.0%,高表达HLA-Ⅰ,HLA-Ⅱ和CD45,为典型的DC表型特征.DC-LAK和LAK细胞对4种肿瘤细胞(GLC-82,A549,moser和MCF-7)的杀伤率,前者为84.7%,66.9%,49.3%和56.0%,后者为43.5%,31.3%,45.0%和32.4%.结论成功的诱导出具有典型形态特征及增强LAK细胞杀伤活性的DC. Invitrogenerationofhumanblooddendriticcellsforactivetumorimmunotherapy Abstract:AIMToestabli
3、shamethodtoculturedendriticcells(DC)invitroandtoobservetheanti-tumoreffectin-ducedbyDC.METHODSDendriticcellsPBMCstimulatedorsolubleantigenabstractedfromlungcan-cercelllineGLC-82.TNF-αandPGE2ixedcellsedDC-LAK.CytotoxicityofDC-LAKandLAKeasuredbyMTTassay.RESULTSTheculturedDCexpressedHLA-Ⅰ,HLA-ⅡandC
4、D45andpositiveratesofCD1a,CD83andCD14oserandMCF-7)PBMCsuc-cessfully. 0引言 近年来树突状细胞(DC)可有效地递呈可溶性肿瘤抗原,增强机体对肿瘤的特异性免疫应答,并在临床取得了成绩[1,2].我们将外周血中贴壁的单个核细胞作为DC的前体细胞,联合应用一组细胞因子诱导获得了纯度较高的人树突状细胞,并将之与LAK细胞结合,体外诱导产生了相对高效而特异的抗肿瘤免疫作用. 1材料和方法 1.1材料 基因重组人IL-4,TNF-α和GM-CSF为Promega公司产品,PGE2购自Sigma公司,淋巴细胞分离液购自上海
5、医学试剂厂,IL-2为本校基因研究所产品,抗CD1a-FITC和抗CD83-FITC购自晶美公司,HLA-Ⅰ,HLA-Ⅱ抗体及羊抗鼠-FITC购自北京邦定公司,酶联免疫检测仪为Labsystem产品;CD14/CD45双色荧光标记抗体由西京医院免疫科提供.肺癌A549为本校基础部免疫学教研室提供;乳腺癌MCF-7细胞引自军事医学科学院;大肠癌moser细胞、肺癌GLC-82细胞为本室保留株.各细胞系均用含50mL・L-1小牛血清的RPMI1640培养液,于37℃,50mL・L-1CO2条件下常规培养. 1.2方法 1.2.1肿瘤可溶性抗原提取 收集肿瘤
6、细胞于低渗条件下反复冻融4次,以5000r・min-1离心30min,取上清,用考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量,过滤后冻存备用. 1.2.2DC及LAK细胞的制备 以常规方法分离PBMC,然后用含100mL・L-1FCS的RPMI1640培养液悬浮,以每孔5×106个细胞加入6孔板,于37℃,50mL・L-1CO2条件下贴壁2h,用预热的培养液轻轻洗出非贴壁细胞,调密度至1×109・L-1,加IL-2300kU・L-1,37℃,50mL・L-1CO2条件下培养,每4d换液1次,为LAK细胞.贴壁
7、细胞加完全1640培养液,用100μg・L-1的GM-CSF及1000U・L-1的IL-4联合刺激诱导DC分化.DC培养4d,加入GLC-82细胞可溶性抗原100μg・L-1,6d加TNF-α(1000kU・L-1),PGE2(10μmol・L-1).10d将DC与LAK细胞混合培养4h,称为DC-LAK. 1.2.3细胞表型分析 收集培养7d的细胞,直接(抗CD14/抗
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