k白血病株树突状细胞诱导及其抗肿瘤功能的体外研究

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1、河北医科大学硕士学位论文K562白血病株树突状细胞诱导及其抗肿瘤功能的体外研究姓名：马洪玉申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：王福旭20070301中文摘要１４，５６２白血病株树突状细胞诱导及其抗肿瘤功能的体外研究摘要目的：本研究将Ｋ５６２细胞诱导分化为ＤＣ，并以Ｋ５６２．ＤＣ作为刺激细胞诱导细胞毒Ｔ淋巴细胞（ｅｒＥ）反应，观察其体外特异性抗肿瘤效应，对白血病细胞来源ＤＣ用于白血病免疫治疗进行初步探讨。方法：１应用ＭＴｒ实验研究丙戊酸钠（ＶＰＡ）对肿瘤细胞增殖抑制实验２应用ＥＬＩＳＡ方法检测丙戊酸钠诱导Ｋ５６２细胞株细胞凋亡的作用３丙戊酸钠将

2、Ｋ５６２细胞诱导分化为ＤＣ（Ｋ５６２．ＤＣ）。４．ＤＣ的鉴定：（Ｉ）形态学：倒置显微镜（Ｏｌｙｍｐｕｓ）下观察细胞形态并摄相。（２）免疫表型：ＰＥ结合的鼠抗人ＣＤｌａ、ＨＬＡＤＲ、ＣＤ８３、ＣＤ８０及ＣＤ８６单抗用流式细胞仪分析检测细胞表面标志。（３）功能鉴定：采用同种异体混合淋巴细胞反应。５．Ｍ＇ＩＴ杀伤实验检测ＤＣ诱导特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞的杀伤活性结果：１．丙戊酸钠（ＶＰＡ）对Ｋ５６２细胞增殖表现出很明显的抑制作用，且在０．１～１００ｍｇ／ｍｌ范围内增殖抑制作用有明显的量效关系。２．随作用时间的延长，丙戊酸钠ｆＶＰＡ）促肿瘤细胞凋亡的现象越

3、明显，各时间段结果之间比较存在显著性差异。３．丙戊酸钠（ＶｒＡ）培养第７天时，细胞均匀分散，变形，体积增大，数量增多，细胞表面可见多个突起，且具有刺状突起中文摘要的细胞数量较前增多。４．通过流式细胞术检测诱导的Ｋ５６２ＤＣ表面分子的表达，结果发现丙戊酸钠（ＶＰＡ）诱导的Ｋ５６２ＤＣ各表面标志的表达，与Ｋ５６２细胞相比均明显上调。５．丙戊酸钠ｆＶＰＡ）诱导的Ｋ５６２ＤＣ具有较强的诱导ＣＴＬ杀伤肿瘤细胞的能力且随效靶比例增高而增强，并显著高于未负载肿瘤可溶性抗原的ＤＣ及单纯Ｔ细胞组。结论：我们以Ｋ５６２细胞为靶细胞，观察ＶＰＡ对Ｋ５６２细胞增殖的影响和

4、诱导凋亡、向树突状细胞分化作用。ＭＴＴ法证实ＶＰＡ对Ｋ５６２细胞具有增殖抑制作用，且作用具有显著的浓度依赖性。进一步的实验证实，高浓度剂量ＶＰＡ对Ｋ５６２细胞增殖抑制的的机理是通过诱导细胞凋亡实现的，而低浓度剂量ＶＰＡ可以诱导ｋ５６２细胞向树突状细胞分化，而且诱导的树突状细胞具有较强的抗原呈递功能和诱导特异性细胞毒性Ｔ淋巴细胞杀伤活性作用。关键词：丙戊酸钠；Ｋ５６２；树突状细胞；白血病英文摘要ＥｘｔｅｒｎａｌＳｔｕｄｙｏｎＫ５６２ＬｅｕｋｅｍｉａＤＣＩｎｄｕｃｅｍｅｎｔａｎｄＩｔｓＡｎｔｉ．ｔｕｍｏｒＦｕｎｃｔｉｏｎＡＢＳＴＲＡＣＴＯｂｊｅｃｔ

5、ｉｖｅ：ＴｈｉｓｒｅｓｅａｒｃｈｉｎｄｕｃｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅｓＫ５６２ｃｅｌｌｓｉｎｔｏＤＣａｎｄｔａｋｅｓＫ５６２．ＤＣａｓｔｈｅｉｎｄｕｃｅｍｅｎｔｔｏｓｔｉｍｕｌａｔｅＣ＇ｒＬ＇ｓｒｅａｃｔｉｏｎ；ｉｔｏｂｓｅｒｖｅｓｔｈｅａｎｔｉ．ｔｕｍｏｒｄｏｍｉｎｏｅｆｆｅｃｔ，ａｎｄｃａｒｒｉｅｓｏｎａｎｉｎｉｔｉａｌｓｔｕｄｙｔｏｔｈｅｌｅｕｋｅｍｉａｃｅｌｌｓｏｕｒｃｅＤＣｗｈｉｃｈｉｓｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｌｅｕｋｅｍｉａｉｍｍｕｎｉｔｙｔｒｅａｔｍｅｎｔ．Ｍｅｔｈｏｄｓ：１ＡｐｐｌｙＭＴｒｔｏｒｅｓｅａｒ

6、ｃｈＶＰＡ＇ｓｒｅｓｔｒａｉｎｅｆｆｅｃｔｔｏｔｈｅｐｒｏｐａｇａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｔｕｍｏｒｃｅｌｌｓ．２ＵｓｅＥＬＩＳＡｔｏｅｘａｍｉｎｅＶＰＡ＇ｓｅｆｆｅｃｔｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇＫ５６２ｃｅｌｌｓ’ａｐｏｐｔｏｓｉｓ．３ＵｓｅＶＰＡｔｏｉｎｄｕｃｅａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｅＫ５６２ｉｎｔｏＤＣ（Ｋ５６２．ＤＱ４ＤＣａｕｔｈｅｎｔｉｃａｔｅ：（１）Ｍｏｒｐｈｏｌｏｇｙ：ＯｂｓｅｒｖｅＯｌｙｍｐｕｓａｎｄｔａｋｅｐｉｃｔｕｒｅｓ．ｔｈｅｃｅｌｌｓｕｎｄｅｒｔｈｅｃｏｎｖｅｒｔｅｄ（２）Ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｅ：ｕｓ

7、ｅＦｌｏｗＣｙｔｏＭｅｔｅｒ（ＦＣＭ）ｔｏａｎａｌｙｚｅａｎｄｅｘａｍｉｎｅＰＥｃｏｍｂｉｎｅｄｍｏｎｏｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄｙ：ＣＤｌａ、ＨＬＡＤＲ、ＣＤ８３、ＣＤ８０ａｎｄＣＤ８６．（３）Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｐｐｒａｉｓａｌ：ａｄｏｐｔｈｏｍｏｇｅｎｅｉｔｙｖａｒｉａｎｔｍｉｘｅｄｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅｒｅａｃｔｉｏｎ５ＵｓｅＭｑＴｔｏｅｘａｍｉｎｅＤＣ’ｓａｃｔｉｖｉｔｙｉｎｉｎｄｕｃｉｎｇＣＴＬＲｅｓｕｌｔｓ：１．ＶＩＡｈａｓｏｂｖｉｏｕｓｅｆｆｅｃｔｉｎｒｅｓｔｒａｉｎｉｎｇＫ５６２ｃｅｌｌｓ’ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔ

8、ｉｏｎ，ａｎｄｔｈｉｓｅｆｆｅｃｔｈａｓｄｉｓｔｉｎｃｔｑｕａｎｔｉｔｙ—ｅｆｆｅｃｔ３英文摘要ｒｅｌａｔｉｏｎ