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《树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用.doc》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、树突状细胞的体外培养及其诱导的抗肿瘤免疫作用作者：张建芳，于文彬，徐修礼，苏明权，马越云，刘家云，丁振若【关键词】树突状细胞关键词:树突状细胞；LAK细胞;免疫治疗摘要：目的建立体外培养扩增树突状细胞(DC)的方法，并观察其诱导的抗肿瘤免疫作用•方法分离外周血单个核细胞，应用GM-CSF及TL-4诱导DC产生，用TNF-ci和PGE2促进其成熟，并用肺癌细胞系GLC-82可溶性抗原致敏•将成熟DC与自体LAK细胞混合培养(DC-LAK),用MTT法检测DC-LAK细胞及LAK细胞对多种肿瘤细胞系的杀伤作用•
2、结果经GM-CSF,IL-4,TNF-a,PGE2作用后，细胞表达CDla阳性率为71.0%,CD8350.0%,CD14阳性率低于10.0%,高表达HLA-I,HLA-II和CD45,为典型的DC表型特征.DC-LAK和LAK细胞对4种肿瘤细胞(GLC-82,A549,moser和MCF-7)的杀伤率，前者为84.7%,66.9%,49.3%和56.0%,后者为43.5%,31.3%,45.0%和32.4%.结论成功的诱导出具有典型形态特征及增强LAK细胞杀伤活性的DC.Tnvitrogeneration
3、ofhumanblooddendriticcel1sforactivetumorimmunotherapyAbstract:AIMToestablishamethodtoculturedendriticcelIsDCinvitroandtoobservetheanti-tumoreffectin-ducedbyDC・METHODSDendriticcellswerederivedfromPBMCstiniiilatedwithGM-CSFandIL-4andDCwerepulsedwithtumorsolu
4、bleantigenabstractedfromlungcan-cercelllineGLC-82.TNF-and卩GEZivereusedtoenhanceantigenpresentingab订ityofDC.PhenotypeofDCwereana-1yzedthroughFACS・MatureDCwerecoculturedwithLAKcellsandthemixedcellswerenaniedDC-LAK・CytotoxicityofDC-LAKandLAKweremeasuredbyMTTa
5、ssay.RESULTSTheculturedDCexpressedHLA-I,HLA-IIandCD45andpositiveratesofCDla,CD83andCD14were71.0%,50.0%&ndlessthanl0.0%respectively.Ki11ingratesofDC-LAKandLAKtothefourcel1lines(GLC-82,A549,moserandMCF-7)were84.7%,66.9%,49.3%,56.0%and43.5%,31.3%,45.0%,32.4%r
6、espectively.CONCLUSTONDCthathavetypicalphenotypeandcouldbeenhancecytotoxityofLAKcouldbeinducedfromPBMCsuc-cessfully.近年来树突状细胞（DC）可有效地递呈可溶性肿瘤抗原，增强机体对肿瘤的特异性免疫应答，并在临床取得了成绩[1,2].我们将外周血中贴壁的单个核细胞作为DC的前体细胞，联合应用一组细胞因子诱导获得了纯度较高的人树突状细胞，并将之与LAK细胞结合，体外诱导产生了相对高效而特异的抗肿瘤免
7、疫作用.1材料和方法1.1材料基因重组人IL-4,TNF-ci和GM-CSF为Promega公司产品，PGE2购自Sigma公司，淋巴细胞分离液购自上海医学试剂厂，儿-2为本校基因研究所产品，抗CDla-FITC和抗CD83-FITC购自晶美公司，HLA-I,HLA-II抗体及羊抗鼠-FITC购自北京邦定公司，酶联免疫检测仪为Labsystem产品;CD14/CD45双色荧光标记抗体由西京医院免疫科提供.肺癌A549为本校基础部免疫学教研室提供;乳腺癌MCF-7细胞引自军事医学科学院;大肠moser细胞、肺
8、癌GLC-82细胞为本室保留株.各细胞系均用含50mL・L-l小牛血清的RPMI1640培养液，于37°C,50mL・L-lC02条件下常规培养.1・2方法1・2・1肿瘤可溶性抗原提取收集肿瘤细胞于低渗条件下反复冻融4次，以5000r・min-l离心30min,取上清，用考马斯亮蓝染料结合法测定蛋白质含量，过滤后冻存备用.1.2.2DC及IJK细胞的制备以常规方法分离P
