罗格列酮对人乳腺癌mdamb231细胞的体外抗肿瘤作用

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1、罗格列酮对人乳腺癌MDAMB231细胞的体外抗肿瘤作用【摘要】　　目的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDAMB231体外生长影响，以评价其在人乳腺癌治疗上的应用潜力.方法：噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDAMB231细胞体外生长抑制作用；应用PPARγ拮抗剂GDAMB231细胞增殖影响与PPARγ受体关系；流式细胞仪分析细胞周期，AnnexinVFITC和TUNEL法检测细胞凋亡.结果：罗格列酮干预下MDAMB231细胞G0/G1期比例上升

2、，而S期比例下降，呈量效关系抑制其生长，IC50=5.2μmol/L.PPARγ拮抗剂GDAMB231细胞增殖抑制作用（P<0.05）；100μmol/L罗格列酮还可诱导MDAMB231细胞凋亡，TUNEL法检测的凋亡率(18.4±3.1)%与AnnexinVFITC法检测的结果一致［(16.6±2.7)%］（P>0.05）.结论：罗格列酮通过PPARγ介导，使MDAMB231细胞G1期阻滞而抑制其增殖，高浓度时还可诱导其发生凋亡，罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物.【关键词】过氧

3、化物酶体增殖物激活受体γ罗格列酮抗肿瘤药乳腺肿瘤MDAMB231细胞0引言由罗格列酮、吡格列酮和环格列酮等组成的噻唑烷二酮类（thiazolidinedione，TZD）人工合成过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisomeproliferatoractivatedreceptorγ，PPARγ)激动剂已被广泛应用于糖尿病的临床治疗当中［1］.近年来的研究显示，TZD等PPARγ激动剂可抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进其凋亡，激活PPARγ受体极有希望成为治疗多种恶性肿瘤的新途径［2］.但目前为止，尚无罗

4、格列酮对人MDAMB231乳腺癌细胞体外抗肿瘤的系统研究报道.鉴于此，我们就细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡等方面探讨罗格列酮对MDAMB231细胞的体外生物学效应，为未来临床抗肿瘤应用提供理论依据.1材料和方法1.1材料MDAMB231人乳腺癌细胞株购自中科院上海细胞库.罗格列酮购自重庆康尔威药业公司（批号:20051，纯度>0.99）；四甲基偶氮唑蓝（MTT）、PPARγ受体拮抗剂GI1640培养基、小牛血清购自HyClone公司；其它试剂均为分析纯.Coultercounter细胞计数仪

5、（BeckmanCoulter公司）；Safire全波长酶标仪（TECAN公司）；FACSCalibur流式细胞仪（BectonDickinson公司）.由于罗格列酮和GSO制成0.1mol/L的母液，-20℃冰箱保存备用.1.2方法1.2.1细胞培养MDAMB231细胞培养于含100mL/L小牛血清的RPMI1640培养基中，常规加入青霉素（105U/L）与链霉素（100mg/L），于37℃,50mL/LCO2培养箱中培养.1.2.2MTT检测细胞增殖抑制率取对数生长期的MDAMB231细胞，计数并

6、调整密度为1.2×108/L，以每孔100μL接种于96孔板中培养，15h后更换培养基，设置对照组和不同浓度药物组（罗格列酮1×10-8，1×10-7，1×10-6，1×10-5，1×10-4mol/L），每组设8个复孔.继续培养24h后，加入10μLMTT（5g/L），继续孵育4h，弃上清，每孔加入100μLDMSO，振荡10min待结晶溶解，于酶标仪上测定570nm波长的A值，计算不同浓度罗格列酮对MDAMB231细胞的生长抑制率：细胞抑制率（%）=［1－试验组A570nm/对照组A570nm］×100

7、％.将药物浓度的对数值和抑制率拟合后计算出IC50.试验重复3次.1.2.3细胞增殖能力检测取对数生长期细胞，细胞计数并调整密度为5×107/L，以每孔1mL接种于6孔板中培养.第2日更换含不同药物组合的新鲜培养基，包括1mL/LDMSO,1μmol/L罗格列酮、5μmol/LG）检测群体细胞中G0/G1,S,G2/M各期细胞百分比.每个药物浓度做3个复孔，同时设不加药物的对照组.1.2.5AnnexinV/PI法流式细胞仪检测细胞凋亡细胞接种密度及用药同细胞周期检测.罗格列酮作用24h后消化收集细胞，PBS洗

8、2遍，用100μL结合缓冲液重悬细胞，加5μLAnnexinVFITC和2.5μLPI，混均，避光于冰上孵育10min，PBS洗1次，400μL结合缓冲液重悬细胞，细胞样品逐一上机检测，同一浓度设3个复孔，试验同时设置不加药物的空白对照组.1.2.6TUNEL法检测细胞凋亡将预铺多聚赖氨酸的盖玻片放入6孔培养板中，每孔接种3×105个细胞，第2日更换为含1×10-6，1×10-5，1