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1、罗格列酮对人乳腺癌MDAMB231细胞的体外抗肿瘤作姓名：2014年6月25日作者：章涛余华荣杨贵忠刘颖菊杨俊卿蒋建新周岐新【摘要】B的：研究过氧化物酶体增殖物激活受体Y(PPARy)激动剂罗格列酮对人乳腺癌细胞MDAMB231体外生K:影响，以评价其在人乳腺癌治疗上的应用潜力.方法：噻唑蓝(MTT)法检测罗格列酮对MDAMB231细胞体外生长抑制作用；应用PPARy拮抗剂GW9662,分析罗格列酮对MDAMB231细胞增殖影响与PPARy受体关系；流式细胞仪分析细胞周期，AnnexinVFITC和TUNEL法检
2、测细胞凋亡.结果：罗格列酮干预下MDAMB231细胞G0/G1期比例上升，而S期比例下降，呈量效关系抑制其生长，IC50=5.2pmol/L.PPARy拮抗剂GW9662可部分逆转罗格列酮对MDAMB231细胞增殖抑制作用(P0.05);100pnol/L罗格列酮还可诱导MDAMB231细胞凋亡，TUNEL法检测的凋亡率(18.4士3.1)%与AnnexinVF1TC法检测的结果一致[(16.6土2.7)%](P0.05).结论：罗格列酮通过PPARj介导，使MDAMB231细胞G1期阻滞而抑制其增殖，高浓度时还
3、可诱导其发生凋亡，罗格列酮有望成为治疗乳腺癌的有效药物.【关键词】过氧化物酶体增殖物激活受体Y罗格列酮抗肿瘤药乳腺肿瘤MDAMB231细胞0引言由罗格列酮、毗格列酮和环格列酮等组成的噻唑烷二酮类(thiazolidinedione,TZD)人工合成过氧化物酶体增殖物激活受体y(peroxisomeproliferatoractivatedreceptory,PPARy)激动剂己被广泛应用于糖尿病的临床治疗当中[1].近年来的研宄显示，TZD等PPARy激动剂可抑制多种肿瘤细胞的增殖并促进其凋亡，激活PPARy受体
4、极有希望成为治疗多种恶性肿瘤的新途径[2].但0前为止，尚无罗格列酮对人MDAMB231乳腺癌细胞体外抗肿瘤的系统研究报道.鉴于此，我们就细胞增殖、细胞周期和细胞凋亡等方面探讨罗格列酮对MDAMB231细胞的体外生物学效应，为未来临床抗肿瘤应用提供理论依据.1材料和方法1.1材料MDAMB231人乳腺癌细胞株购自中科院上海细胞库.罗格列酮购自重庆康尔威药业公司（批号:20051,纯度0.99）；四甲基偶氮唑蓝（MTT）、PPARy受体拮抗剂GW9662购白Sigma公司；TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒购自南京凯
5、基生物；AnnexinVFITCKit为BeckmanCoulter公trj产品；RPMI1640培养基、小牛血清购自HyClone公司；其它试剂均为分析纯.Coultercounter细胞计数仪（BeckmanCoulter公司）；Safire全波长酶标仪（TECAN公司）；FACSCalibur流式细胞仪（BectonDickinson公司）.由于罗格列酮和GW9662难溶于水，用DMSO制成0.1mol/L的母液，-20°C冰箱保存备用.1.2方法1.2.1细胞培养MDAMB231细胞培养于含100mL/L
6、小牛血清的RPMI1640培养基中，常规加入青霉素（105U/L）与链霉素（100mg/L）,于37°C,50mL/LCO2培养箱中培养.1.2.2MTT检测细胞增殖抑制率取对数生长期的MDAMB231细胞，计数并调整密度为1.2X108/L,以每孔100接种于96孔板中培养，15h后更换培养基，设置对照组和不同浓度药物组（罗格列酮1x10-8,1x10-7,1x10-6,1x10-5,1x10-4mol/L）,每组设8个复孔.继续培养24h后，加入10^LMTT（5g/L）,继续孵育4h,弃上清，每孔加入100
7、（iLDMSO,振荡10min待结晶溶解,于酶标仪上测定570nm波长的A值，计算不同浓度罗格列酮对MDAMB231细胞的生长抑制率：细胞抑制率(％)=[1—试验组A570nm/对照组A570nm]xlOO%.将药物浓度的对数值和抑制率拟合后计算出IC50.试验重复3次.1.2.3细胞增殖能力检测取对数生长期细胞，细胞计数并调整密度为5x107/L，以每孔1niL接种于6孔板中培养.第2日更换含不同药物组合的新鲜培养基，包括1mL/LDMSO,1pnol/L罗格列酮、5pimol/LGW9662以及1gmol/L
8、罗格列酮与5gmol/LGW9662联用共4个组，每48h更换含相应药物的新鲜培养基.分别于用药后第2,4,6日收集细胞计数，每组计3个复孔，求其平均值.试验重复3次.1.2.4细胞周期分析取对数生长期细胞，调整密度为3x108/L,以每孔1mL接种于6孔板中培养.第2日更换含不同浓度罗格列酮(1x10-6,1x10-5,1x10-4mol/L)的新鲜培养基，继续培养24
